流式細(xì)胞術(shù)

前言

　　流式細(xì)胞術(shù)是20世紀(jì)60年代末發(fā)展起來(lái)的細(xì)胞定性和定量的技術(shù)，通過(guò)收集激光照射到細(xì)胞后的散射光信號(hào)和熒光信號(hào)反映細(xì)胞的物理化學(xué)特征，并且根據(jù)細(xì)胞的物理化學(xué)特征分選得到感興趣的細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)的出現(xiàn)與發(fā)展涉及很多學(xué)科和技術(shù)，包括細(xì)胞與分子生物學(xué)、流體力學(xué)、電磁理論和生物技術(shù)、激光技術(shù)、熒光技術(shù)、光電子技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、納米技術(shù)等?？梢哉f(shuō)，像流式細(xì)胞術(shù)這樣涉及這么多學(xué)科領(lǐng)域的一種技術(shù)并不多見。流式細(xì)胞術(shù)是現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)發(fā)展的綜合交叉的產(chǎn)物，是集多種技術(shù)發(fā)展于一體的“大成者”。流式細(xì)胞術(shù)也是一個(gè)高速發(fā)展的技術(shù)，從最初只配備1個(gè)激光器、只有1個(gè)散射光通道和1個(gè)熒光通道發(fā)展到現(xiàn)在的可以配備4個(gè)激光器并可以同時(shí)16色18參數(shù)進(jìn)行分析或者分選，這個(gè)發(fā)展歷程也只經(jīng)歷了不到半個(gè)世紀(jì)。而且，流式細(xì)胞術(shù)更是一個(gè)應(yīng)用特別廣泛的技術(shù)，不僅應(yīng)用于基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和生物學(xué)如免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和微生物學(xué)等的各個(gè)領(lǐng)域，并已成為這些領(lǐng)域研究不可或缺的基本技術(shù)方法，而且現(xiàn)在的流式細(xì)胞術(shù)更是廣泛應(yīng)用于臨床的各個(gè)方面，如血常規(guī)檢測(cè)、白血病的臨床分型、急性感染的早期診斷等。此外，流式細(xì)胞術(shù)還成功應(yīng)用于環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品衛(wèi)生防疫等各個(gè)方面，而且其應(yīng)用還在不斷地向各個(gè)領(lǐng)域擴(kuò)展延伸?？梢哉f(shuō)，流式細(xì)胞術(shù)具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值和應(yīng)用前景。

內(nèi)容概要

本書主要介紹流式細(xì)胞術(shù)的原理、操作和應(yīng)用，分為概述、流式細(xì)胞術(shù)的原理、流式圖、流式細(xì)胞術(shù)的基本操作和技巧、流式分析的應(yīng)用和流式分選的應(yīng)用6個(gè)部分。概述部分主要介紹流式細(xì)胞術(shù)的基本概念和幾款分析型流式細(xì)胞儀和分選型流式細(xì)胞儀；原理部分具體介紹流式細(xì)胞儀的液流系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、檢測(cè)分析系統(tǒng)和分選系統(tǒng)；流式圖部分主要介紹了流式直方圖、流式散點(diǎn)圖和流式等高線圖；操作部分介紹了單細(xì)胞懸液樣品的制備、熒光素偶聯(lián)抗體標(biāo)記、光電倍增管電壓設(shè)置、對(duì)照設(shè)置、補(bǔ)償設(shè)置、閾值設(shè)定、死細(xì)胞問(wèn)題處理、分選模式選擇、上樣速度控制、分選設(shè)門原則、分選基本步驟共11個(gè)部分的內(nèi)容；流式分析應(yīng)用部分具體介紹了流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)方面的應(yīng)用，并且擴(kuò)展到基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和生物學(xué)方面的應(yīng)用；流式分選應(yīng)用部分闡述了不同條件下流式分選的策略選擇和注意事項(xiàng)，同時(shí)還介紹了各種干細(xì)胞包括腫瘤干細(xì)胞等的流式分選方法。

書籍目錄

序前言1 概述1.1 流式細(xì)胞術(shù)基本概念1.2 分析型流式細(xì)胞儀介紹1.3 分選型流式細(xì)胞儀介紹參考文獻(xiàn)2 流式細(xì)胞儀的原理2.1 液流系統(tǒng)2.2 光路系統(tǒng)2.3 檢測(cè)分析系統(tǒng)2.4 分選系統(tǒng)參考文獻(xiàn)3 流式圖3.1 流式通道3.2 流式直方圖3.3 流式散點(diǎn)圖3.4 流式等高線圖參考文獻(xiàn)4 流式細(xì)胞術(shù)的基本操作與技巧4.1 樣品制備4.1.1 獨(dú)立細(xì)胞樣品制備4.1.2 免疫器官樣品制備4.1.3 實(shí)體臟器樣品制備4.2 熒光素偶聯(lián)抗體及其標(biāo)記方法4.2.1 熒光素4.2.2 熒光素偶聯(lián)抗體4.2.3 樣品封閉4.2.4 熒光素偶聯(lián)抗體標(biāo)記4.3 光電倍增管電壓設(shè)定4.4 對(duì)照的設(shè)置4.4.1 陰性對(duì)照的設(shè)置4.4.2 FM.對(duì)照4.4.3 陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置4.5 補(bǔ)償調(diào)節(jié)4.5.1 補(bǔ)償調(diào)節(jié)的原理4.5.2 調(diào)節(jié)補(bǔ)償?shù)木唧w方法4.5.3 三色和四色分析補(bǔ)償調(diào)節(jié)方法4.5.4 影響補(bǔ)償大小的因素4.6 閾值設(shè)定4.7 流式分析中的死細(xì)胞問(wèn)題4.7.1 減少樣品中死細(xì)胞比例的方法4.7.2 流式分析時(shí)區(qū)分死細(xì)胞和活細(xì)胞的方法4.8 流式分選模式選擇4.8.1 純化模式4.8.2 富集模式4.8.3 單細(xì)胞模式4.9 上樣速度控制4.9.1 流式分析速度控制4.9.2 流式分選速度控制4.10 分選設(shè)門基本原則4.11 流式分選基本步驟參考文獻(xiàn)5 流式分析術(shù)的應(yīng)用5.1 細(xì)胞群比例測(cè)定5.2 表型測(cè)定5.3 檢測(cè)細(xì)胞因子5.3.1 胞內(nèi)染色法檢測(cè)細(xì)胞因子5.3.2 胞內(nèi)染色法與ELISA法比較5.3.3 CBA法測(cè)定細(xì)胞因子5.3.4 CBA法與ELISA法比較5.4 檢測(cè)細(xì)胞增殖5.4.1 相對(duì)計(jì)數(shù)法5.4.2 示蹤染料標(biāo)記法5.4.3 Brdu標(biāo)記法5.4.4 其他方法5.5 檢測(cè)細(xì)胞凋亡5.5.1 annexinV／PI雙染色法5.5.2 SYTO／PI雙染色法5.5.3 細(xì)胞：DNA含量分析法檢測(cè)細(xì)胞凋亡5.5.4 線粒體損傷檢測(cè)法5.5.5 活化的caspase-3檢測(cè)法5.5.6 熒光素偶聯(lián)的caspase抑制劑(FLICA)標(biāo)記法5.5.7 甲酰胺誘導(dǎo)ssDNA單抗檢測(cè)法5.5.8 TUNEL法5.6 檢測(cè)細(xì)胞周期5.6.1 非特異性核酸熒光染料標(biāo)記法5.6.2 特異性細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白檢測(cè)法5.7 檢測(cè)細(xì)胞殺傷能力5.8 檢測(cè)細(xì)胞吞噬功能5.9 檢測(cè)胞內(nèi)活化的激酶5.10 檢測(cè)基因表達(dá)5.10.1 GFP報(bào)道基因系統(tǒng)5.10.2 JocZ報(bào)道基因系統(tǒng)5.10.3 內(nèi)酰胺酶報(bào)道基因系統(tǒng)5.11 微生物學(xué)中的應(yīng)用5.11.1 熒光素偶聯(lián)抗體直接檢測(cè)法5.11.2 抗體結(jié)合人工熒光微球直接檢測(cè)法5.11.3 微生物活性流式檢測(cè)5.11.4 人工微球熒光免疫試驗(yàn)檢測(cè)抗體5.11.5 熒光原位雜交流式檢測(cè)法5.11.6 PCR免疫微珠法5.11.7 原位PCR雜交流式檢測(cè)法5.12 檢測(cè)鈣相關(guān)分子5.12.1 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)游離的鈣離子水平5.12.2 檢測(cè)鈣蛋白酶活性5.12.3 檢測(cè)細(xì)胞膜鈣泵活性5.13 表觀遺傳學(xué)中的應(yīng)用5.13.1 ChIP一0n-beads法5.13.2 檢測(cè)細(xì)胞水平組蛋白修飾情況……6 流式分選術(shù)的應(yīng)用參考文獻(xiàn)

章節(jié)摘錄

　　特定波長(zhǎng)的激光束直接照射到高壓驅(qū)動(dòng)的液流，產(chǎn)生的光信號(hào)被多個(gè)接收器接收，一個(gè)是在激光束直線方向上接收到的散射光信號(hào)（前向角散射），其他是在激光束垂直方向上接收到的光信號(hào)，包括散射光信號(hào)（側(cè)向角散射）和熒光信號(hào)。液流中懸浮的直徑從0.2－150um的細(xì)胞能夠使激光束發(fā)生散射光，細(xì)胞上結(jié)合的熒光素被激光激發(fā)后能夠發(fā)射熒光。散射光信號(hào)和熒光信號(hào)被相應(yīng)的接收器接收，根據(jù)信號(hào)的強(qiáng)弱波動(dòng)就能反映出每個(gè)細(xì)胞的物理化學(xué)特征?！　?.流式細(xì)胞術(shù)的三大要素　　流式細(xì)胞術(shù)有三大要素，分別為流式細(xì)胞儀、樣品細(xì)胞和熒光染料或者熒光素偶聯(lián)抗體。流式細(xì)胞術(shù)是在流式細(xì)胞儀上操作的，流式細(xì)胞儀根據(jù)其功能的不同可以分為分析型流式細(xì)胞儀和分選型流式細(xì)胞儀，前者只能流式分析，不能分選純化目標(biāo)細(xì)胞，后者能夠同時(shí)進(jìn)行流式分析和流式分選?！　×魇郊?xì)胞術(shù)檢測(cè)的對(duì)象是細(xì)胞，而且是呈獨(dú)立狀態(tài)的懸浮于液體中的細(xì)胞，即單細(xì)胞懸液。流式細(xì)胞術(shù)不能直接檢測(cè)組織塊中的細(xì)胞，要檢測(cè)臟器或組織中的細(xì)胞，必須先用各種方法將臟器或組織制備成單細(xì)胞懸液，然后標(biāo)記上熒光素偶聯(lián)抗體，才能被流式細(xì)胞儀檢測(cè)。流式細(xì)胞術(shù)不能直接檢測(cè)分子，但是用人工合成的顆粒代替細(xì)胞，然后將該分子的抗體與人工顆粒結(jié)合，可以間接檢測(cè)分子，如用CBA法檢測(cè)細(xì)胞因子等?！　　?/pre>




編輯推薦
　　《流式細(xì)胞術(shù)：原理、操作及應(yīng)用》對(duì)流式細(xì)胞術(shù)的闡述從原理到技巧再到應(yīng)用，層次分明，重點(diǎn)突出：即使是從未接觸過(guò)流式細(xì)胞術(shù)的初學(xué)者，通過(guò)閱讀《流式細(xì)胞術(shù)：原理、操作及應(yīng)用》也能完全讀懂并深入了解其內(nèi)涵；對(duì)有經(jīng)驗(yàn)的操作者則可查缺補(bǔ)漏，進(jìn)一步加深理解、靈活運(yùn)用。深入淺出，通俗易懂著者對(duì)流式細(xì)胞術(shù)有著豐富的操作經(jīng)驗(yàn)和深入透徹的理解，用最平實(shí)的語(yǔ)言詮釋了此技術(shù)的原理、操作和應(yīng)用。方法全面，技巧突出《流式細(xì)胞術(shù)：原理、操作及應(yīng)用》全面介紹了流式細(xì)胞術(shù)的基本操作方法，特別突出了著者的心得體會(huì)和技巧，幫助讀者進(jìn)一步提高操作水平。理論聯(lián)系實(shí)踐《流式細(xì)胞術(shù)：原理、操作及應(yīng)用》運(yùn)用大量的實(shí)例和示意圖具體而形象地闡述了流式細(xì)胞術(shù)的原理和應(yīng)用。以其在免疫學(xué)上的應(yīng)用為基礎(chǔ)，擴(kuò)展到基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和生物學(xué)應(yīng)用的多個(gè)方面。重點(diǎn)強(qiáng)化流式分選《流式細(xì)胞術(shù)：原理、操作及應(yīng)用》還重點(diǎn)介紹了流式分選的具體應(yīng)用，闡述了不同條件下流式分選的策略選擇和注意事項(xiàng)，以及各種干細(xì)胞包括腫瘤干細(xì)胞等的流式分選。　　流式細(xì)胞術(shù)廣泛應(yīng)用于生物學(xué)和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)如免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和微生物學(xué)等，成為這些領(lǐng)域研究的重要技術(shù)，而且流式細(xì)胞術(shù)還應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)的許多方面，如白血病的臨床分型、感染的早期診斷等此外，流式細(xì)胞術(shù)還成功應(yīng)用于環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品衛(wèi)生防疫等方面，并且其應(yīng)用還在不斷地向各個(gè)領(lǐng)域擴(kuò)展延伸……





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