醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)叢書

內(nèi)容概要

　　《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)叢書：醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》圍繞醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的主要研究對(duì)象，設(shè)置七個(gè)有代表性的綜合性專業(yè)實(shí)驗(yàn)；為研究設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)，提出研究問題，開放型引導(dǎo)學(xué)生自主探究，以培養(yǎng)、啟發(fā)學(xué)生的科學(xué)思維及綜合應(yīng)用技能。最后附錄包括生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室常見試劑的配制等，以供實(shí)踐參考?！夺t(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)叢書：醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》以提高醫(yī)學(xué)本科生的科學(xué)實(shí)踐能力為宗旨，可供醫(yī)學(xué)各專業(yè)五年制及七、八年制本科生生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)選用，也可供相關(guān)學(xué)科科技人員參考。

書籍目錄

第一篇 實(shí)驗(yàn)理論 第一章 吸收光譜法 第一節(jié) 光譜分析基礎(chǔ)知識(shí) 一、光的基本性質(zhì) 二、吸收光譜 三、物質(zhì)顏色與光吸收 第二節(jié) 光吸收的基本定律 一、吸光度與透光率 二、吸收光譜分析的基本定律 三、吸光系數(shù) 四、偏離Beer定律的因素 第三節(jié) 吸收光譜法的應(yīng)用 一、定性分析 二、定量分析 三、吸收光譜分析的條件控制 第四節(jié) 分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)和使用 一、分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu) 二、分光光度計(jì)的使用與要求 第二章 電泳技術(shù) 第一節(jié) 電泳的基本原理和分類 一、電泳的基本原理 二、電泳的遷移率 三、電泳的分類 第二節(jié) 電泳的影響因素 一、樣品的性質(zhì) 二、電場(chǎng)強(qiáng)度 三、緩沖液的性質(zhì) 四、支持介質(zhì) 第三節(jié) 區(qū)帶電泳 一、醋酸纖維薄膜電泳 二、瓊脂糖凝膠電泳 三、聚丙烯酰胺凝膠電泳 第四節(jié) 特殊的電泳 一、等電聚焦電泳 二、雙向電泳 第五節(jié) 電泳后的染色 一、蛋白質(zhì)的染色 二、核酸的染色 第三章 層析法 第一節(jié) 層析法的原理與分類 一、層析法的基本原理 二、層析法的分類 三、柱層析的基本組成 第二節(jié) 常用的層析法 一、薄層吸附層析 二、分配層析 三、離子交換層析 四、凝膠層析 五、親和層析 六、高效液相層析 第四章 酶學(xué)分析 第一節(jié) 酶的分離純化及鑒定 一、酶的分離純化 二、酶制劑的鑒定 第二節(jié) 酶活性測(cè)定 一、酶活性測(cè)定方法 二、酶的活性單位 第三節(jié) 酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究 一、底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 二、溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 三、pH值對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 四、激活劑、抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 五、酶促反應(yīng)樣品及參比溶液的設(shè)定 第四節(jié) 酶法分析 一、單酶反應(yīng)定量法 二、耦聯(lián)酶反應(yīng)定量法 第五節(jié) 同工酶分析 第六節(jié) 酶在生物醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用 一、酶在疾病診斷中的應(yīng)用 二、酶在疾病治療中應(yīng)用 第五章 蛋白質(zhì)的分離與純化 第一節(jié) 蛋白質(zhì)分離純化的原理和基本方法 一、沉淀法 二、透析與超濾 三、超速離心 四、層析 五、電泳 第二節(jié) 選擇蛋白質(zhì)分離純化方法的策略 第三節(jié) 蛋白質(zhì)的制備 一、材料的選擇與預(yù)處理 二、細(xì)胞的破碎 三、提取 四、分級(jí)分離步驟 五、結(jié)晶 第四節(jié) 蛋白質(zhì)的濃縮、干燥和保存 一、濃縮 二、干燥 三、樣品的保存 第六章 核酸的分離純化與鑒定分析 第一節(jié) 核酸分離純化 一、核酸分離純化的原則及要求 二、核酸提取的主要步驟 三、核酸的濃縮、沉淀與洗滌 第二節(jié) 核酸的鑒定與分析 一、紫外分光光度法的定量、定性分析 二、核酸凝膠電泳 三、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù) 第二篇 實(shí)驗(yàn)篇 第七章 基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)一 蛋白質(zhì)含量的測(cè)定 一、酚試劑法 二、BCA法 三、雙縮脲法 四、紫外吸收法 實(shí)驗(yàn)二 核酸含量的測(cè)定 一、二苯胺法測(cè)定DNA含量 二、地衣酚法測(cè)定RNA含量 三、紫外分光光度法分析核酸的純度及濃度 實(shí)驗(yàn)三 腎上腺素與胰島素對(duì)血糖濃度的影響——鄰甲苯胺法測(cè)定 實(shí)驗(yàn)四 血清蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳 實(shí)驗(yàn)五 血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳 實(shí)驗(yàn)六 SDS—PAGE測(cè)定蛋白質(zhì)分子量 實(shí)驗(yàn)七 氨基酸的紙層析 實(shí)驗(yàn)八 離子交換層析分離混合氨基酸 實(shí)驗(yàn)九 凝膠層析分離血紅蛋白與魚精蛋白 實(shí)驗(yàn)十 血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶酶活性測(cè)定（改良Mohun法） 實(shí)驗(yàn)十一 底物濃度對(duì)酶活性的影響——堿性磷酸酶Km值的測(cè)定 實(shí)驗(yàn)十二 溫度和pH值對(duì)酶活性的影響 實(shí)驗(yàn)十三 丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制 第八章 綜合性實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)十四 常見血液生化指標(biāo)的酶終點(diǎn)法分析 一、酶法測(cè)定血清甘油三酯 二、酶法測(cè)血清膽固醇 三、磷鎢酸—鎂沉淀法（PTA—Mg2+法）測(cè)定血清HDL—C含量 四、酶法測(cè)定血液葡萄糖 實(shí)驗(yàn)十五 乳酸脫氫酶（LDH）的分析 一、血清乳酸脫氫酶（LDH）總活性測(cè)定 二、血清乳酸脫氫酶同工酶分離——瓊脂糖凝膠電泳法 實(shí)驗(yàn)十六 血清免疫球蛋白IgG的分離純化與鑒定 一、IgG的分離與純化 二、IgG制品鑒定法 實(shí)驗(yàn)十七 谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶融合蛋白的表達(dá)及純化 一、細(xì)菌轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)和GST融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá) 二、Western blotting檢測(cè)GST融合蛋白表達(dá) 三、親和層析純化GST融合蛋白 四、SDS—PAGE鑒定GST融合蛋白的純度 實(shí)驗(yàn)十八 外周血白細(xì)胞基因組DNA的分離純化、鑒定與分析 一、外周血白細(xì)胞DNA的提?。∟al法） 二、紫外分光光度法分析DNA的純度及濃度 三、DNA的瓊脂糖凝膠電泳 四、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR） 實(shí)驗(yàn)十九 小鼠肝組織細(xì)胞RNA的分離純化、鑒定與分析 一、TRIzol法提取RNA 二、紫外分光光度法分析RNA的純度及濃度 三、RNA的甲醛變性凝膠電泳 四、逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT—PCR） 實(shí)驗(yàn)二十 質(zhì)粒DNA的提取、酶切和電泳分析 一、SDS—堿裂解法小量制備質(zhì)粒DNA 二、質(zhì)粒DNA限制性內(nèi)切酶酶切分析 三、質(zhì)粒DNA酶切產(chǎn)物的非變性PAGE分析 第九章 研究設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)二十一 堿性磷酸酶的分離純化、鑒定及酶動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)二十二 載脂蛋白AI的原核表達(dá)、分離純化及鑒定分析 附錄 附錄一 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)須知 附錄二 實(shí)驗(yàn)室基本操作 附錄三 試劑分級(jí)及常用酸堿溶液 附錄四 常用緩沖液和試劑的配制 參考文獻(xiàn)

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁：   插圖：   分配層析中，通常采用一種多孔性固體支持物（如濾紙、硅膠、纖維素粉、淀粉等）附著的一種溶劑作為固定相，另一種與固定相溶劑互不相溶的溶劑可以沿固定相流動(dòng)，稱為流動(dòng)相。以濾紙作為支持物的分配層析，稱為紙層析。紙層析固定相指濾紙結(jié)合的水，流動(dòng)相則為不溶性的非極性溶劑（展開劑）。展開時(shí)，非極性展開劑沿濾紙流經(jīng)樣品點(diǎn)，樣品中各物質(zhì)在兩相之間不斷地進(jìn)行分配，Kd大的物質(zhì)留在固定相中相對(duì)多，隨流動(dòng)相移動(dòng)得較慢；反之亦然。 3.應(yīng)用 紙層析法的定性和定量方法與薄層吸附層析類似。 紙層析法在臨床生化檢驗(yàn)中應(yīng)用廣泛，可用于血液氨基酸、類固醇激素、糖蛋白、兒茶酚胺代謝產(chǎn)物等的分析，以及安眠藥、抗生素等藥物在體內(nèi)代謝情況的檢測(cè)。 三、離子交換層析（ion—exchange chromatography） 1.原理 離子交換層析是利用離子交換劑對(duì)樣品離子的親和力不同，借以分離混合物中各種離子的一種方法。根據(jù)離子交換劑所連接的交換基團(tuán)不同，又分為陽離子交換層析和陰離子交換層析。 離子交換層析的固定相是帶有大量電荷的離子交換劑，流動(dòng)相是具有一定pH值和離子強(qiáng)度的電解質(zhì)溶液。當(dāng)混合物溶液中帶有與離子交換劑相反電荷的溶質(zhì)流經(jīng)離子交換劑時(shí)，被離子交換劑選擇性吸附。然后提高流動(dòng)相離子強(qiáng)度或改變其pH值，被吸附的溶質(zhì)可被置換而洗脫下來，結(jié)合弱的分子被先洗脫下來，結(jié)合強(qiáng)的被后洗脫下來，從而達(dá)到分離混合物中各種帶電荷溶質(zhì)的目的。 如圖示3—2所示，自身帶正電荷的陰離子交換劑必須吸附帶負(fù)電荷的離子以維持電中性。當(dāng)樣品離子流經(jīng)陰離子交換劑時(shí)，其中的陰離子被吸附。樣品離子帶負(fù)電荷越多，與陰離子交換劑的親和力越大，結(jié)合越緊密，洗脫過程中被洗出也越慢。相反帶負(fù)電荷越少的離子則越先被洗脫出來。

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