臨床流式細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)

前言

　　歷時(shí)四載筆耕不止，今日終于收筆，手捧著墨香流溢、沉甸甸的書稿，喜悅難抑！說(shuō)實(shí)話，黃燦燦的收獲里確實(shí)蘊(yùn)藏耕犁之苦，但就在這苦中我卻品茗了縷縷清香，以至多少披星戴月的夜晚，甚至通宵達(dá)旦，都能如履春天的小路般舒暢。在某種意義上，流式改變了我的生活?！　×魇脚c檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)其他亞學(xué)科完全不同，需要超預(yù)期的心血付出才能駕馭自如！首先，流式細(xì)胞儀就不同于全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀、全自動(dòng)生化分析儀、血凝分析儀等檢驗(yàn)科貫有儀器，它不是傻瓜照相機(jī)，各個(gè)部件、指令在使用中非常靈活，每一種檢驗(yàn)項(xiàng)目需要編輯相應(yīng)的檢測(cè)軟件（流式稱之為方案），初期使用甚至在測(cè)定每一份臨床標(biāo)本時(shí)，儀器每一個(gè)光學(xué)通道的電壓、增益都需要檢測(cè)者給儀器指定數(shù)值（流式稱之為賦值），由于儀器有兩個(gè)散射光通道和數(shù)個(gè)熒光通道（目前國(guó)內(nèi)機(jī)型一般有4～6個(gè)熒光通道），增加了賦值的難度。賦值不合適，細(xì)胞分群不佳，甚至在流式檢測(cè)圖上連細(xì)胞的影子都見(jiàn)不到，更談何分析細(xì)胞的表達(dá)等等！不僅如此，流式還需要檢測(cè)者給儀器指定扣除熒光兩兩交疊、三重交疊甚至更多重交疊對(duì)單一檢測(cè)熒光采集的影響（流式稱之為補(bǔ)償）。同時(shí)，儀器液壓系統(tǒng)、氣壓系統(tǒng)的壓力對(duì)細(xì)胞分群都有影響。流式的上述與眾不同，使儀器的操作使用難度高過(guò)了檢驗(yàn)科其他任何一款儀器。其次，流式對(duì)檢驗(yàn)者的背景知識(shí)結(jié)構(gòu)要求高過(guò)了檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的其他亞學(xué)科。流式是對(duì)存在于臨床標(biāo)本中的一個(gè)個(gè)細(xì)胞進(jìn)行的檢測(cè)，可以是對(duì)細(xì)胞表面某種或某幾種蛋白質(zhì)表達(dá)的有無(wú)及有多少的定性定量分析，也可以是對(duì)細(xì)胞內(nèi)部（包括細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核）蛋白質(zhì)或多肽成分的有無(wú)及有多少的定性定量分析，還可以是對(duì)細(xì)胞內(nèi)DNA和（或）RNA含量多少的測(cè)定及DNA異常的診斷，如DNA斷裂（凋亡）、DNA倍體異常（腫瘤）等。流式檢驗(yàn)者在擁有檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)理論與技術(shù)的同時(shí)，還需要對(duì)細(xì)胞生物學(xué)在臨床各科中的應(yīng)用有所認(rèn)識(shí)，才能夠根據(jù)臨床的需要設(shè)計(jì)（編輯）出相應(yīng)的能夠達(dá)到檢測(cè)目標(biāo)的檢驗(yàn)方案，對(duì)每一份標(biāo)本呈現(xiàn)出來(lái)的流式圖像進(jìn)行準(zhǔn)確、到位的判斷。細(xì)胞生物學(xué)是一門新興學(xué)科，細(xì)胞生物學(xué)在臨床各科中的應(yīng)用新穎且五彩斑斕，因此，一個(gè)流式團(tuán)隊(duì)需要配備至少1～2名經(jīng)過(guò)醫(yī)學(xué)碩士甚至博士訓(xùn)練的領(lǐng)隊(duì)，一位優(yōu)秀的流式從業(yè)者需要具有跨學(xué)科的、廣博的醫(yī)學(xué)知識(shí)為支撐，能做到專業(yè)知識(shí)的與時(shí)俱進(jìn)最好。　　《臨床流式細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)》一書伴隨我個(gè)人學(xué)習(xí)流式的全過(guò)程，是我5年流式檢驗(yàn)從業(yè)生涯的記錄，更是全體編寫人員對(duì)流式的體會(huì)和經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)及展望。書中提出了臨床流式細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)的概念與內(nèi)涵，呼吁學(xué)界正視檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)又一個(gè)新興亞學(xué)科的誕生！

內(nèi)容概要

作者在廣泛收集中外臨床流式細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)最新成果的基礎(chǔ)上，結(jié)合自己的研究心得和臨床經(jīng)驗(yàn)，分15章詳細(xì)介紹了流式檢驗(yàn)的理論基礎(chǔ)、流式細(xì)胞儀的性能、特點(diǎn)與使用、常見(jiàn)影響因素、標(biāo)本的采集/儲(chǔ)存與運(yùn)輸、51個(gè)具體流式檢驗(yàn)項(xiàng)目(方案)的基本原理、主要試劑、主要儀器、檢驗(yàn)步驟、檢測(cè)方案及解讀、儀器參數(shù)、注意事項(xiàng)、檢驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容及參考范圍、臨床意義及質(zhì)量控制措施等。本書內(nèi)容全面、新穎，實(shí)用性強(qiáng)，是一部極具指導(dǎo)性的臨床流式細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)專著，適合檢驗(yàn)科醫(yī)師、生物醫(yī)學(xué)科研人員、教師和學(xué)生閱讀參考。

作者簡(jiǎn)介

吳麗娟，主任醫(yī)師、教授、博士、碩士研究生導(dǎo)師。 
    1965年11月生，四川省成都市人，祖籍陜西省安康市。1989年畢業(yè)于重慶醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系五年制本科班；1999年在第三軍醫(yī)大學(xué)全軍免疫學(xué)研究所獲醫(yī)學(xué)免疫學(xué)碩士學(xué)位，師從吳玉章教授；2004年在重慶醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系和第三軍醫(yī)大學(xué)野戰(zhàn)外科研究所聯(lián)合培養(yǎng)下獲臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)博士學(xué)位，師從康格非教授、朱佩芳研究員、蔣建新研究員；1996～1997年在北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所分子免疫學(xué)研究室進(jìn)修，師從沈倍奮院士、黎燕研究員；2004年在香港城市大學(xué)生物醫(yī)藥研發(fā)中心任高級(jí)研究主任；1989年8月～2009年5月先后在第三軍醫(yī)大學(xué)附屬西南醫(yī)院、大坪醫(yī)院檢驗(yàn)科工作，歷任醫(yī)師/助教、主治醫(yī)師/講師、副主任醫(yī)師/副教授；現(xiàn)任成都軍區(qū)總醫(yī)院檢驗(yàn)科主任醫(yī)師，第三軍醫(yī)大學(xué)兼職教授、碩士研究生導(dǎo)師，全軍軍事檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專委會(huì)委員，中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)微生態(tài)學(xué)會(huì)重慶市專委會(huì)委員，全軍及重慶市醫(yī)療事故鑒定專家，《第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)》審稿專家，《國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》、《檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床》等期刊編委。 
    從事檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)臨床、教學(xué)及科研工作21年，經(jīng)歷學(xué)士、碩士、博士的專業(yè)系統(tǒng)培養(yǎng)，檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)理論扎實(shí)，技術(shù)全面，在臨床流式細(xì)胞檢驗(yàn)、基因診斷領(lǐng)域造詣?shì)^深，具有豐富的流式細(xì)胞檢驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)和基因診斷經(jīng)驗(yàn)，擅長(zhǎng)基因表達(dá)調(diào)控、基因工程蛋白多肽類的生物合成、新型醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)方法與試劑的研發(fā)等，負(fù)責(zé)并完成國(guó)家級(jí)研究課題2項(xiàng)，軍隊(duì)課題1項(xiàng)，重慶市課題1項(xiàng)，發(fā)表第一作者論文70余篇，主編、副主編專著各1部，參編專著2部，獲軍隊(duì)科技進(jìn)步獎(jiǎng)4項(xiàng)、國(guó)家發(fā)明專利1項(xiàng)。曾擔(dān)任四年制、五年制、八年制本科生《實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)》《臨床免疫學(xué)》教學(xué)工作21年，發(fā)表教學(xué)理論研究論文10余篇，負(fù)責(zé)教學(xué)研究課題1項(xiàng)，培養(yǎng)研究生數(shù)名。

書籍目錄

第1章  總論  第一節(jié)  概述  第二節(jié)  常用染色技術(shù)    一、細(xì)胞免疫熒光染色技術(shù)    二、核酸熒光染色技術(shù)    三、熒光微球捕獲染色技術(shù)  第三節(jié)  基本檢驗(yàn)流程    一、標(biāo)本的采集、運(yùn)送與儲(chǔ)存    二、標(biāo)本處理    三、開機(jī)    四、儀器光路與流路的檢查與校準(zhǔn)    五、上機(jī)測(cè)定    六、結(jié)果分析    七、檢驗(yàn)報(bào)告    八、儀器清洗    九、關(guān)機(jī)  第四節(jié)  方法學(xué)特點(diǎn)    一、單細(xì)胞分析    二、定量分析    三、快速性    四、準(zhǔn)確性    五、特異性    六、重復(fù)性    七、多參數(shù)分析第2章  臨床型流式細(xì)胞儀  第一節(jié)  結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與工作原理    一、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)    二、工作原理  第二節(jié)  技術(shù)指標(biāo)    一、熒光測(cè)量靈敏度    二、分辨率    三、前向散射光檢測(cè)靈敏度    四、分析速度  第三節(jié)  技術(shù)特色    一、門與設(shè)門    二、圖像數(shù)據(jù)資料顯示    三、FS閾值設(shè)定    四、補(bǔ)償設(shè)置  第四節(jié)  使用方法與技巧    一、開機(jī)程序    二、光路和流路的檢測(cè)程序    三、清洗程序    四、關(guān)機(jī)程序    五、檢驗(yàn)方案的編輯    六、新編輯檢驗(yàn)方案參數(shù)的調(diào)試  第五節(jié)  常見(jiàn)故障排除與維護(hù)    一、常見(jiàn)故障排除    二、儀器的維護(hù)常識(shí)  第六節(jié)  流式細(xì)胞儀工作術(shù)語(yǔ)第3章  常見(jiàn)影響因素  一、溫度  二、pH  三、熒光染料濃度  四、雜質(zhì)  五、細(xì)胞固定劑  六、溶液黏度  七、其他因素第4章  標(biāo)本的采集、運(yùn)送與保存  第一節(jié)  標(biāo)本采集    一、免疫功能分析類標(biāo)本    二、血小板分析類標(biāo)本    三、白血病細(xì)胞免疫分型類標(biāo)本    四、DNA分析類標(biāo)本    五、其他流式檢驗(yàn)項(xiàng)目標(biāo)本  第二節(jié)  標(biāo)本運(yùn)送    一、運(yùn)送方法    二、注意事項(xiàng)  第三節(jié)  標(biāo)本保存    一、短期保存    二、長(zhǎng)期保存第5章  單細(xì)胞懸液的制備  第一節(jié)  概述    一、物理法    二、酶學(xué)法    三、化學(xué)法  第二節(jié)  各種懸液的制備    一、血液?jiǎn)渭?xì)胞懸液    二、骨髓單細(xì)胞懸液    三、脫落細(xì)胞單細(xì)胞懸液    四、實(shí)體瘤組織單細(xì)胞懸液    五、石蠟包埋組織單細(xì)胞核懸液    六、培養(yǎng)細(xì)胞單細(xì)胞懸液第6章  機(jī)體造血功能監(jiān)測(cè)  第一節(jié)  CD34+干細(xì)胞的測(cè)定    一、造血干細(xì)胞移植    二、CD34+干細(xì)胞檢測(cè)的基本原理    三、國(guó)外常用CD34+干細(xì)胞流式細(xì)胞檢驗(yàn)方法    四、造血干細(xì)胞和造血祖細(xì)胞的分類檢測(cè)  第二節(jié)  網(wǎng)織紅細(xì)胞測(cè)定  第三節(jié)  網(wǎng)織血小板測(cè)定第7章  機(jī)體免疫功能監(jiān)測(cè)  第一節(jié)  T淋巴細(xì)胞及其亞群的檢測(cè)    一、總T淋巴細(xì)胞、T4淋巴細(xì)胞和T8淋巴細(xì)胞    二、Th細(xì)胞和Ti細(xì)胞    三、Tc細(xì)胞和Ts細(xì)胞    四、Th1和Th2細(xì)胞    五、Tc1和Tc2細(xì)胞    六、αβT淋巴細(xì)胞和γδT淋巴細(xì)胞    七、初始T細(xì)胞和記憶T細(xì)胞    八、活化T細(xì)胞  第二節(jié)  B淋巴細(xì)胞及其亞群的檢測(cè)    一、B淋巴細(xì)胞    二、B1和B2淋巴細(xì)胞  第三節(jié)  NK細(xì)胞的檢測(cè)  第四節(jié)  單核細(xì)胞的檢測(cè)  第五節(jié)  機(jī)體免疫功能監(jiān)測(cè)的質(zhì)量控制第8章  機(jī)體凝血功能監(jiān)測(cè)  第一節(jié)  血小板的形態(tài)、結(jié)構(gòu)與功能    一、形態(tài)    二、結(jié)構(gòu)    三、功能  第二節(jié)  血小板流式檢驗(yàn)現(xiàn)狀  第三節(jié)  血小板精確計(jì)數(shù)    一、單平臺(tái)法    二、雙平臺(tái)法  第四節(jié)  活化血小板測(cè)定    一、循環(huán)活化血小板測(cè)定    二、體外刺激活化血小板測(cè)定    三、血小板-白細(xì)胞聚集體檢測(cè)    四、血小板-單核細(xì)胞聚集體測(cè)定  第五節(jié)  血小板膜糖蛋白檢測(cè)  第六節(jié)  血小板微粒測(cè)定第9章  自身免疫性疾病的鑒別診斷  第一節(jié)  紅細(xì)胞表面相關(guān)免疫球蛋白的測(cè)定  第二節(jié)  粒細(xì)胞表面相關(guān)免疫球蛋白的測(cè)定  第三節(jié)  血小板表面相關(guān)免疫球蛋白的測(cè)定第10章  腫瘤臨床中的應(yīng)用  第一節(jié)  細(xì)胞周期與DNA倍體檢測(cè)  第二節(jié)  細(xì)胞凋亡檢測(cè)    一、PI染色法    二、Annexin V-PI染色法    三、APO 2.7測(cè)定法    四、末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記(TUNEL)法  第三節(jié)  腫瘤化療多藥耐藥性監(jiān)測(cè)第11章  白血病免疫診斷與分型  第一節(jié)  正常骨髓造血細(xì)胞分化成熟的抗原表達(dá)規(guī)律    一、粒系和單核系細(xì)胞抗原    二、淋巴細(xì)胞分化發(fā)育的抗原    三、T系、B系和髓系的特異性標(biāo)志抗原  第二節(jié)  白血病免疫診斷與分型的基本原理與意義    一、白血病免疫分型的發(fā)展    二、流式細(xì)胞免疫分型的基本原理    三、流式細(xì)胞免疫分型的優(yōu)點(diǎn)  第三節(jié)  流式細(xì)胞免疫分型的檢驗(yàn)方法    一、主要儀器    二、主要試劑    三、標(biāo)本采集    四、樣本制備    五、細(xì)胞染色    六、流式細(xì)胞儀測(cè)定    七、數(shù)據(jù)分析與解釋  第四節(jié)  臨床常見(jiàn)白血病類型的免疫診斷與分型要點(diǎn)    一、前驅(qū)B和T急性淋巴細(xì)胞白血病/淋巴母細(xì)胞淋巴瘤    二、慢性淋巴細(xì)胞白血病/小淋巴細(xì)胞淋巴瘤    三、急性髓系白血病    四、急性未定系列白血病  第五節(jié)  臨床少見(jiàn)白血病類型的免疫診斷與分型要點(diǎn)    一、毛細(xì)胞白血病    二、漿細(xì)胞骨髓瘤/漿細(xì)胞瘤    三、幼稚淋巴細(xì)胞白血病    四、T細(xì)胞大顆粒淋巴細(xì)胞白血病    五、侵襲性NK細(xì)胞白血病    六、成人T細(xì)胞白血病  第六節(jié)  新進(jìn)展    一、不設(shè)門流式方法的應(yīng)用    二、介紹幾個(gè)較有用的組合  第七節(jié)  質(zhì)量控制    一、有效的樣本制備技術(shù)    二、流式細(xì)胞儀的校準(zhǔn)和優(yōu)化設(shè)置    三、細(xì)胞系別與類型判定第12章  強(qiáng)直性脊柱炎的鑒別診斷  第一節(jié)  Beckman-Coulter HLA-B27/HLA-B7表達(dá)的測(cè)定  第二節(jié)  BD HLA-B27/CD3表達(dá)的測(cè)定第13章  陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿的鑒別診斷  第一節(jié)  紅細(xì)胞表面CD55和CD59表達(dá)的測(cè)定  第二節(jié)  白細(xì)胞表面CD55和CD59表達(dá)的測(cè)定  第三節(jié)  白細(xì)胞的FLAER法測(cè)定第14章  細(xì)胞因子測(cè)定  第一節(jié)  流式微球分析技術(shù)與流式液相芯片技術(shù)  第二節(jié)  人類Th1/Th2細(xì)胞因子的檢測(cè)第15章  質(zhì)量控制  第一節(jié)  室內(nèi)質(zhì)量控制    一、分析前對(duì)樣本和試劑的質(zhì)量控制    二、分析中儀器及檢測(cè)過(guò)程的質(zhì)量控制    三、分析后數(shù)據(jù)傳輸?shù)馁|(zhì)量控制  第二節(jié)  室間質(zhì)量評(píng)價(jià)    一、國(guó)家衛(wèi)生部流式檢驗(yàn)室間質(zhì)評(píng)    二、國(guó)際流式檢驗(yàn)室間質(zhì)評(píng)附錄A  Multicycle DNA含量與細(xì)胞周期分析軟件附錄B  臨床常見(jiàn)流式檢驗(yàn)指標(biāo)的正常參考范圍附錄C  臨床流式細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)相關(guān)名詞附錄D  常用流式檢驗(yàn)試劑的配制

圖書封面

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