出版時間:2009-4 出版社:張波、尤昭玲、李凡成、 肖子曾 人民軍醫(yī)出版社 (2009-04出版) 作者:張波 編 頁數(shù):170
前言
隨著生命科學的迅速發(fā)展,生物化學和分子生物學越來越成為生命科學各領域的重要基礎學科,生物化學與分子生物學實驗技術(shù)已成為生命學科各領域研究的常規(guī)技術(shù)。為了使同學們能夠順利完成生物化學與分子生物學實驗,了解現(xiàn)代生物化學與分子生物學實驗最基本的技術(shù),并在今后專業(yè)課的學習和工作中靈活應用,我們編寫了本教材。本書主要包括基礎理論和實驗操作兩個部分?;A理論部分包括生物化學與分子生物學的基本操作技術(shù)原理,其中第l章由譚峰編寫,第2章由程麗娟編寫,第3章由張波和劉文龍編寫,第4章由張波和成細華編寫,第5章由張波編寫,第6章由張波、楊利平和賀愛蘭編寫。實驗操作部分包括生化物質(zhì)的分離鑒定與定量測定等生物化學基本實驗以及常用的分子生物學實驗。其中第7章由張波、成細華、劉文龍和劉輝編寫。第8章由張波、周賽男、張月娟、成細華和劉輝編寫。第9章由張波和劉輝編寫。第10章由張波、楊利平和賀愛蘭編寫。本書的編寫風格簡明、實用。編寫中突出實驗的基礎性、技能性和綜合性。在編寫過程中,去除了一些過時的實驗技術(shù),將過去實驗教學過程中的單一技能訓練轉(zhuǎn)化為綜合實驗技能訓練,在實驗課程體系和內(nèi)容的設置方面以系統(tǒng)綜合大實驗為核心并以科學研究思路為線索設計系列教學實驗,讓學生在實驗課程中體驗科研的過程,使學生從整體上了解進行生物化學及分子生物學科學研究的思路和方法,培養(yǎng)學生正確的科研思維能力和綜合素質(zhì)。本教材涉及了廣泛的實驗技術(shù),可作為高等院校生物和醫(yī)藥農(nóng)林等專業(yè)學生生物化學和分子生物學實驗的指導用書,也可供生物化學和分子生物學有關研究人員、企業(yè)技術(shù)人員等參考。盡管我們用最大努力來編寫本教材,但仍可能存在錯誤的地方,希望讀者在使用的過程中提出寶貴意見,以便更好地完善本教材。在本書的編寫過程中受到了湖南師范大學胡興旺博士的支持,同時劉群良、胡梅、陳伶利和吳瓊等幾位老師也對本書編寫作出了貢獻,在此一并表示感謝。
內(nèi)容概要
《生物化學與分子生物學實驗教程》包括基礎理論和實驗操作兩大部分?;A理論部分闡述了生物化學基本操作、緩沖液配制、分離技術(shù)、層析技術(shù)、電泳技術(shù)、光譜分析技術(shù)和常用的分子生物學技術(shù);實驗操作部分介紹了物質(zhì)分離鑒定、物質(zhì)定量測定、蛋白質(zhì)性質(zhì)及常用分子生物學技術(shù)方法等70個實驗,每個實驗包括目的、原理、試劑與器材、操作方法、注意事項和思考題?!渡锘瘜W與分子生物學實驗教程》內(nèi)容系統(tǒng),闡述簡明,注重學生動手能力的培養(yǎng)和實驗過程的科學體驗,主要供高等醫(yī)學院校相關專業(yè)實驗教學之用,也可供相關專業(yè)的科研人員、企業(yè)技術(shù)人員閱讀參考。
書籍目錄
第一篇 基礎理論第1章 基本操作與緩沖液的配制第一節(jié) 洗滌液的配制及實驗用器皿的清洗第二節(jié) 常用儀器的使用第三節(jié) 溶液的混勻與過濾第四節(jié) 試劑及試劑保存與配制第五節(jié) 實驗誤差與提高實驗準確度的方法第2章 常用的簡單分離技術(shù)第一節(jié) 離心第二節(jié) 過濾第三節(jié) 濃縮第四節(jié) 沉淀第五節(jié) 透析第3章 層析技術(shù)第一節(jié) 層析的原理第二節(jié) 吸附層析第三節(jié) 排阻層析第四節(jié) 分配層析第五節(jié) 離子交換層析第六節(jié) 親和層析第七節(jié) 氣相層析第八節(jié) 高效液相層析第4章 電泳技術(shù)第5章 光譜分析技術(shù)第6章 常用的分子生物學技術(shù)第一節(jié) 核酸的分離純化技術(shù)第二節(jié) 重組DNA技術(shù)第三節(jié) 核酸分子雜交技術(shù)第四節(jié) PCR技術(shù)第五節(jié) 蛋白質(zhì)相互作用技術(shù)原理第六節(jié) 蛋白質(zhì)與DNA相互作用技術(shù)原理第二篇 實驗操作第7章 物質(zhì)的分離與鑒定實驗實驗一 氨基酸的分離鑒定(紙層析法)實驗二 血紅蛋白與魚精蛋白的層析分離實驗三 離子交換層析法分離超氧化物歧化酶實驗四 親和層析純化胰蛋白酶實驗五 氣相層析實驗六 高效液相層析實驗七 血清蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳實驗八 DNA的瓊脂糖凝膠電泳實驗九 平板聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白質(zhì)實驗十 梯度PAGE分離血清蛋白質(zhì)實驗十一 SDS-PAGE測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量實驗十二 血紅蛋白吸收曲線的繪制實驗十三 茯苓多糖和豬苓多糖水解與鑒定實驗十四 肝組織中核酸的分離與鑒定實驗十五 酪蛋白的制備第8章 物質(zhì)定量測定實驗實驗一 核黃素熒光定量測定實驗二 鄰甲苯胺法測定血糖濃度實驗三 維生素C的測定(2,4-二硝基苯肼法)實驗四 用正交法測定幾種因素對酶活力的影響實驗五 血清總膽固醇的測定實驗六 血清膽固醇測定(鄰苯二甲醛法)實驗七 血清三酰甘油測定實驗八 血清膽紅素的定量測定實驗九 血清肌酐定量(苦味酸法)實驗十 血清鈣定量(鄰甲酚酞絡合劑法)實驗十一 血清鉀定量(四苯硼鈉法)實驗十二 血清尿素氮定量(二乙酰一肟法)實驗十三 血漿二氧化碳結(jié)合力測定(滴定法)實驗十四 蛋白質(zhì)含量測定(紫外吸收法)實驗十五 蛋白質(zhì)含量測定(考馬斯亮藍法)實驗十六 蛋白質(zhì)含量測定(雙縮脲法)實驗十七 蛋白質(zhì)含量測定(Folin-酚法)實驗十八 RNA的定量測定(苔黑酚法)實驗十九 還原糖和總糖含量的測定(3,5-二硝基水楊酸比色法)實驗二十 糖的定量測定(蒽酮比色法)實驗二十一 果膠質(zhì)含量測定(重量法)實驗二十二 脂肪碘值的測定實驗二十三 中藥杏仁脂質(zhì)成分的定量測定(索氏提取法)第9章 蛋白質(zhì)性質(zhì)實驗實驗一 酶的特性實驗二 茚三酮反應實驗三 蛋白質(zhì)等電點的測定實驗四 蛋白質(zhì)的沉淀反應實驗五 丙二酸對琥珀酸脫氫酶活性的影響實驗六 乳酸脫氫酶及其輔酶的作用實驗七 堿性磷酸酶米氏常數(shù)測定(雙倒數(shù)作圖法)實驗八 血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶的活性測定第10章 分子生物學實驗實驗一 從植物組織提取基因組DNA實驗二 從動物組織中提取基因組DNA實驗三 細菌基因組DNA的制備實驗四 從瓊脂糖凝膠中回收3-磷酸甘油醛脫氫酶基因片段實驗五 LB、2YT液體和固體培養(yǎng)基的配制實驗六 質(zhì)粒DNA少量快速提取實驗七 質(zhì)粒DNA的大量提取和純化實驗八 人ATP7B基因第十三外顯子的PCR實驗九 肝組織總RNA的提取實驗十 GAPDH mRNA的反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)實驗十一 利用實時定量PCR分析TNFAIPl在不同細胞系中的表達實驗十二 重組質(zhì)粒的連接實驗十三 大腸桿菌DH5a感受態(tài)細胞的制備實驗十四 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細胞及篩選、鑒定實驗十五 重組質(zhì)粒DNA的酶切實驗十六 DNA印跡雜交(一)實驗十七 DNA印跡雜交(二)實驗十八 肝癌細胞總RNA的RNA印跡實驗實驗十九 蛋白質(zhì)印跡實驗實驗二十 酵母雙雜交系統(tǒng)確定蛋白質(zhì)相互作用實驗實驗二十一 GST融合蛋白質(zhì)沉降技術(shù)檢測蛋白質(zhì)相互作用實驗實驗二十二 免疫共沉淀實驗實驗二十三 電泳遷移率實驗實驗二十四 染色質(zhì)免疫沉淀實驗
章節(jié)摘錄
插圖:第1章 基本操作與緩沖液的配制在生物化學與分子生物學實驗中,有一些操作幾乎是每次實驗都需要用到的,它們對實驗成功非常重要,這些操作稱為基本操作,本章對這些操作進行介紹。緩沖液是很多實驗中使用的基本溶液,為了方便實驗的準備工作,本章也對常用緩沖液的配制方法進行介紹。第一節(jié)洗滌液的配制及實驗用器皿的清洗實驗中所使用的玻璃儀器及塑料器皿清潔與否,直接影響實驗結(jié)果,往往由于器皿的不清潔或被污染而造成較大的實驗誤差,甚至會出現(xiàn)相反的實驗結(jié)果。因此,實驗用器皿洗滌工作是十分重要的基本操作,是做好實驗的前提及實驗成敗的關鍵因素之一。一、洗滌液的種類及配制1.0.5%去垢劑溶液(常用洗滌液)。2.鉻酸洗液又稱重鉻酸鉀一濃硫酸洗滌液,簡稱洗液,廣泛用于玻璃儀器的洗滌,配制方法如下。(1)稱取5g重鉻酸鉀粉末放入250ml燒杯中,加5ml水,盡量使其溶解。然后邊攪拌,邊緩緩注入濃硫酸100ml,待洗液溫度冷卻至室溫,將其轉(zhuǎn)移到有玻璃塞子的細頸干燥試劑瓶內(nèi)貯存?zhèn)溆?。?)量取100ml工業(yè)硫酸置于250ml燒杯中,小心熱,慢慢加59重鉻酸鉀粉末,邊加邊攪拌,待全部溶解后,冷卻并貯于有玻璃塞子的試劑瓶中備用。3.濃HCI(工業(yè)用)常用于洗去水垢或某些無機鹽沉淀。4.濃HNO3常用于洗滌除去金屬離子。
編輯推薦
《生物化學與分子生物學實驗教程》的編寫風格簡明、實用。編寫中突出實驗的基礎性、技能性和綜合性。在編寫過程中,去除了一些過時的實驗技術(shù),將過去實驗教學過程中的單一技能訓練轉(zhuǎn)化為綜合實驗技能訓練,在實驗課程體系和內(nèi)容的設置方面以系統(tǒng)綜合大實驗為核心并以科學研究思路為線索設計系列教學實驗,讓學生在實驗課程中體驗科研的過程,使學生從整體上了解進行生物化學及分子生物學科學研究的思路和方法,培養(yǎng)學生正確的科研思維能力和綜合素質(zhì)。
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