生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)

前言

生物化學(xué)是醫(yī)學(xué)院和各類(lèi)綜合性大學(xué)生命科學(xué)的基礎(chǔ)課，亦是許多農(nóng)林院校大多數(shù)專(zhuān)業(yè)的專(zhuān)業(yè)基礎(chǔ)課，而該課程的學(xué)習(xí)必須建立在堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)之上，因此，生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)是生物化學(xué)教學(xué)的重要組成部分。生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)不僅能加深學(xué)生對(duì)理論知識(shí)的理解，而且在培養(yǎng)學(xué)生實(shí)驗(yàn)操作技能，實(shí)際分析和解決問(wèn)題的能力以及培養(yǎng)獨(dú)立工作能力和嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的科學(xué)態(tài)度等方面具有不可替代的作用。隨著生命科學(xué)的迅猛發(fā)展，各種生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)的不斷改進(jìn)和更新，原有生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教材在實(shí)驗(yàn)教學(xué)的系統(tǒng)性、實(shí)用性和先進(jìn)性等方面都存在不同程度的不足。為適應(yīng)高等院校面向21世紀(jì)教學(xué)改革的需要，加強(qiáng)對(duì)學(xué)生能力、素質(zhì)和創(chuàng)新意識(shí)的培養(yǎng)，四川農(nóng)業(yè)大學(xué)生物化學(xué)課題組按照《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱》的要求，在總結(jié)多年開(kāi)設(shè)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)課的基礎(chǔ)上，廣泛汲取兄弟院校生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的寶貴經(jīng)驗(yàn)，參閱有關(guān)資料編纂了該《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》。本教程注意實(shí)驗(yàn)內(nèi)容編排的實(shí)用性、科學(xué)性和先進(jìn)性，并盡可能覆蓋生物化學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。全書(shū)分為兩部分，第一部分重點(diǎn)介紹生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本要求與常用儀器的使用方法，使學(xué)生對(duì)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)從理論角度上加以感知，了解各種生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的基本原理、方法和應(yīng)用，同時(shí)也為學(xué)生和其他讀者提供一個(gè)較為完整的實(shí)驗(yàn)技術(shù)指南；第二部分為實(shí)驗(yàn)，包括基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)和綜合性實(shí)驗(yàn)?；A(chǔ)性實(shí)驗(yàn)部分，本書(shū)選取了糖、蛋白質(zhì)、酶、維生素、核酸、代謝共六個(gè)系列，并分類(lèi)編排。每個(gè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目包括目的、原理、器材與試劑、操作步驟、結(jié)果處理和注意事項(xiàng)等，力求做到簡(jiǎn)明扼要，操作具體，充分體現(xiàn)實(shí)驗(yàn)技能訓(xùn)練的實(shí)用性。綜合性實(shí)驗(yàn)部分，本書(shū)編撰了三個(gè)帶有設(shè)計(jì)理念的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，有目的的通過(guò)這一部分的實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步提高學(xué)生的理解能力、實(shí)踐能力和分析能力，并促進(jìn)學(xué)生創(chuàng)造性思維的形成，提高學(xué)生對(duì)科學(xué)研究的興趣。最后，在本書(shū)的附錄部分，我們匯集了生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的各種緩沖溶液配方等相關(guān)數(shù)據(jù)資料，以方便讀者查閱。在本書(shū)的編撰過(guò)程中，我們參考了同行專(zhuān)家、學(xué)者已出版的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方面的書(shū)籍及一些網(wǎng)絡(luò)資料，在此對(duì)相關(guān)作者表示衷心感謝！參加本書(shū)編寫(xiě)的人員有茍琳、單志、王曉麗、晏本菊、陳惠、吳琦、張軍杰和韓學(xué)易。本書(shū)可供高等院校生物工程、生物科學(xué)、食品工程、醫(yī)學(xué)等專(zhuān)業(yè)作為實(shí)驗(yàn)課教材，也可供相關(guān)專(zhuān)業(yè)教師和科研人員參考。鑒于編者水平有限，書(shū)中不足之處在所難免，敬請(qǐng)讀者批評(píng)指正。

內(nèi)容概要

《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教程注意實(shí)驗(yàn)內(nèi)容編排的實(shí)用性、科學(xué)性和先進(jìn)性，并盡可能覆蓋生物化學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。全書(shū)分為兩部分，第一部分重點(diǎn)介紹生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本要求與常用儀器的使用方法；第二部分為實(shí)驗(yàn)，包括基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)和綜合性實(shí)驗(yàn)。

書(shū)籍目錄

第一部分  生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)基本要求與常用儀器使用方法　第一章  生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)基本操作　第二章  生物活性成分的制備　第三章  分光光度技術(shù)　第四章  熒光光譜技術(shù)　第五章  層析技術(shù)　第六章  電泳技術(shù)　第七章  離心技術(shù)第二部分  實(shí)驗(yàn)　第八章 糖　  實(shí)驗(yàn)一  總糖和還原糖測(cè)定(3，5-二硝基水楊酸法)　  實(shí)驗(yàn)二  蒽酮比色定糖法　  實(shí)驗(yàn)三  血液葡萄糖含量的測(cè)定(Folin-Wu法)　第九章  蛋白質(zhì)　  實(shí)驗(yàn)四  蛋白質(zhì)含量的測(cè)定　  Ⅰ．凱氏定氮法測(cè)定蛋白質(zhì)含量　  Ⅱ．紫外吸收法測(cè)定蛋白質(zhì)含量　  Ⅲ．雙縮脲(Biuret)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量　  Ⅳ．Folin-酚法測(cè)定蛋白質(zhì)含量　  Ⅴ．考馬斯亮藍(lán)G-250法測(cè)定蛋白質(zhì)含量　  實(shí)驗(yàn)五  醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白質(zhì)　  實(shí)驗(yàn)六  不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離預(yù)染的血清脂蛋白　  實(shí)驗(yàn)七  SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量　  實(shí)驗(yàn)八  凝膠層析法測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量　  實(shí)驗(yàn)九  植物組織中游離氨基酸的分離鑒定　  實(shí)驗(yàn)十  蛋白質(zhì)兩性解離及等電點(diǎn)的測(cè)定　第十章 酶　  實(shí)驗(yàn)十一  影響酶作用的因素　  實(shí)驗(yàn)十二  過(guò)氧化氫酶活力的測(cè)定　  實(shí)驗(yàn)十三  淀粉酶活力的測(cè)定?　  實(shí)驗(yàn)十四  植酸酶活性的測(cè)定　  實(shí)驗(yàn)十五  蛋白酶活性的測(cè)定　  實(shí)驗(yàn)十六  血清堿性磷酸酶活性的測(cè)定　第十一章  維生素　  實(shí)驗(yàn)十七  維生素C的定量測(cè)定　  實(shí)驗(yàn)十八  維生素B1的定量測(cè)定　第十二章  核酸　  實(shí)驗(yàn)十九  植物組織中DNA的提取和純度鑒定　  實(shí)驗(yàn)二十  肝臟DNA的提取及純度鑒定　  實(shí)驗(yàn)二十一  質(zhì)粒DNA的小量提取(堿裂解法)　  實(shí)驗(yàn)二十二  納米磁性粒子法小量提取細(xì)菌質(zhì)粒DNA　  實(shí)驗(yàn)二十三  植物葉片總RNA小量制備(Trizol法)　  實(shí)驗(yàn)二十四  紫外吸收法測(cè)定核酸含量　  實(shí)驗(yàn)二十五  二苯胺法測(cè)定DNA含量　  實(shí)驗(yàn)二十六  定磷法測(cè)定RNA含量　  實(shí)驗(yàn)二十七  瓊脂糖凝膠電泳分離鑒定DNA　第十三章  體內(nèi)代謝　  實(shí)驗(yàn)二十八  酶促轉(zhuǎn)氨基作用及其鑒定　  實(shí)驗(yàn)二十九  胰島素和腎上腺素對(duì)血糖濃度的影響　  實(shí)驗(yàn)三十  血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)活力測(cè)定　  實(shí)驗(yàn)三十一  植物總黃酮的提取與測(cè)定　第十四章  生物化學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)　  實(shí)驗(yàn)三十二  SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳及蛋白印跡　  實(shí)驗(yàn)三十三  豬血超氧化物歧化酶的分離純化、活性測(cè)定及同工酶鑒定　  實(shí)驗(yàn)三十四  目的基因的PCR擴(kuò)增附錄一  常用緩沖溶液的配制方法附錄二  硫酸銨飽和度的常用表附錄三  常用指示劑的配制參考文獻(xiàn)

章節(jié)摘錄

插圖：2.毛細(xì)管電泳檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展就毛細(xì)管電泳而言，極細(xì)的毛細(xì)管內(nèi)徑帶來(lái)了很高的分離效能，但同時(shí)也給樣品組分的檢測(cè)帶來(lái)困難，對(duì)檢測(cè)技術(shù)相應(yīng)提出了較高的要求，如何增加檢測(cè)器的靈敏度，同時(shí)又不造成明顯的區(qū)帶展寬，一直是CE技術(shù)發(fā)展中的一個(gè)至關(guān)重要的問(wèn)題。迄今為止，已有許多檢測(cè)技術(shù)與CE聯(lián)用，在不同的實(shí)際應(yīng)用領(lǐng)域中發(fā)揮作用。（1）紫外可見(jiàn)光吸收檢測(cè)。通過(guò)紫外可見(jiàn)光吸收進(jìn)行檢測(cè)是毛細(xì)管電泳中應(yīng)用最廣泛的方法。石英毛細(xì)管因可透過(guò)20nm波長(zhǎng)以下的紫外光，因此不僅允許從紫外到可見(jiàn)光這一波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)樣品組分進(jìn)行檢測(cè)。而且可將透光窗口直接開(kāi)在毛細(xì)管上，進(jìn)行“在柱”檢測(cè)。（2）熒光檢測(cè)法。熒光檢測(cè)法也是毛細(xì)管電泳中一種常見(jiàn)的“在柱”檢測(cè)法，因?qū)M分區(qū)帶不會(huì)引起額外展寬，而且檢測(cè)靈敏度很高，尤其是激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)法（LIF），其靈敏度可高達(dá)1×10-12～1×10-16mol／L-1，是目前毛細(xì)管電泳中最靈敏的一種檢測(cè)方法。（3）電化學(xué)檢測(cè)方法。電導(dǎo)檢測(cè)、電位檢測(cè)、安培檢測(cè)是電化學(xué)檢測(cè)常用的三種方法，該檢測(cè)模式可避免光學(xué)類(lèi)檢測(cè)器遇到的光程太短的問(wèn)題，對(duì)電活性組分的檢測(cè)具有靈敏度高、線性范圍寬、選擇性好以及價(jià)格低廉等特點(diǎn)。安培檢測(cè)是三種電化學(xué)檢測(cè)模式中最易實(shí)現(xiàn)，應(yīng)用較廣的一種檢測(cè)技術(shù)，為微體積環(huán)境中電活性物質(zhì)的測(cè)定提供了高靈敏度的檢測(cè)方法。（4）集成毛細(xì)管電泳芯片。該項(xiàng)技術(shù)以晶體硅、玻璃、塑料（指有機(jī)玻璃）、陶瓷和硅橡膠為基本材料，借助毛細(xì)管電泳技術(shù)，將樣品進(jìn)樣、反應(yīng)、分離、檢測(cè)等過(guò)程集成到一起的多功能化的技術(shù)，該項(xiàng)工作與分析儀器的微型化、小型化和集成化緊密相連，使得其能符合現(xiàn)代生物化學(xué)、制藥工業(yè)的低成本和高產(chǎn)出的需求。3.毛細(xì)管電泳分離模式的發(fā)展按分離介質(zhì)和分離原理不同，毛細(xì)管電泳有多種操作模式，而各種模式的分離機(jī)理是不相同的。如今的毛細(xì)管電泳不再僅僅局限于分離帶電荷的大分子，也適合分離陽(yáng)離子、陰離子以及中性分子。常見(jiàn)的毛細(xì)管電泳的分離模式如下：（1）毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CZE）。CZE又稱(chēng)毛細(xì)管自由電泳，毛細(xì)管內(nèi)只充入緩沖溶液，在直流高壓驅(qū)動(dòng)下，溶質(zhì)以不同的速率在分立的區(qū)帶內(nèi)進(jìn)行遷移而被分離。CZE的應(yīng)用范圍很寬，包括對(duì)氨基酸、多肽、離子、對(duì)映體等物質(zhì)的分析。

編輯推薦

《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》是由西南交通大學(xué)出版社出版的。

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