臨床神經(jīng)科學(xué)研究基本技術(shù)

前言

神經(jīng)科學(xué)基礎(chǔ)研究以實(shí)驗(yàn)研究為主體，而神經(jīng)科學(xué)研究技術(shù)則是臨床神經(jīng)病學(xué)快速發(fā)展的重要支撐條件。近年來(lái)，神經(jīng)科學(xué)技術(shù)特別是分子生物學(xué)技術(shù)、神經(jīng)干細(xì)胞技術(shù)等的迅速發(fā)展為神經(jīng)病學(xué)實(shí)驗(yàn)提供了許多合理、有效的新方法和新技術(shù)。目前，我國(guó)雖在神經(jīng)病學(xué)檢查技術(shù)方面有了一些著作，但內(nèi)容簡(jiǎn)單。雖然有較全面的神經(jīng)科學(xué)研究方法專著，但臨床上缺乏實(shí)用性。迄今尚無(wú)一本同時(shí)全面闡述神經(jīng)病學(xué)、神經(jīng)科學(xué)研究技術(shù)方面的專著或教材，而是散見(jiàn)于各種醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)中的研究資料，不便于查尋。本書(shū)基于全面、公認(rèn)、新穎的原則，收集了神經(jīng)病學(xué)、臨床神經(jīng)科學(xué)相關(guān)的研究技術(shù)。各章作者在編寫(xiě)過(guò)程中廣泛涉獵國(guó)內(nèi)外具有代表性的專業(yè)書(shū)籍，每種研究技術(shù)均包括了已經(jīng)獲得的研究成果，并盡量給出方法學(xué)評(píng)價(jià)。在編寫(xiě)過(guò)程中，力爭(zhēng)詳盡介紹各項(xiàng)技術(shù)，不乏經(jīng)驗(yàn)的介紹、技巧的揭示等，圖文并茂，具有良好的可操作性。同時(shí)，也注重先進(jìn)性和實(shí)用性的結(jié)合，避免工作中的重復(fù)浪費(fèi)。為了使讀者更好地理解和運(yùn)用各項(xiàng)技術(shù)，每章開(kāi)始對(duì)經(jīng)典的研究技術(shù)都做了回顧和簡(jiǎn)單介紹。本書(shū)是一本集現(xiàn)代各種神經(jīng)病學(xué)研究手段、實(shí)驗(yàn)技術(shù)的基本原理和操作方法的工具書(shū)，也是目前國(guó)內(nèi)較為全面、系統(tǒng)的臨床神經(jīng)科學(xué)實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)的教材。在內(nèi)容上重點(diǎn)突出當(dāng)代神經(jīng)病學(xué)、神經(jīng)科學(xué)研究方法，注重技術(shù)的新穎性、先進(jìn)性、可操作性及實(shí)用性。本書(shū)收載了一些常用的重要的方法，主要涉及神經(jīng)病理、膜片鉗、微透析、血管內(nèi)皮前體細(xì)胞及循環(huán)血管內(nèi)皮細(xì)胞、組織血流動(dòng)力學(xué)、神經(jīng)干細(xì)胞、突觸體、神經(jīng)行為學(xué)等方面的內(nèi)容，書(shū)末附有神經(jīng)科學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)常用數(shù)據(jù)。全書(shū)共分18章，涵蓋現(xiàn)代神經(jīng)病學(xué)、臨床神經(jīng)科學(xué)研究的主要技術(shù)和實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)于從事神經(jīng)病學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、認(rèn)知科學(xué)、信息科學(xué)及其相關(guān)領(lǐng)域的科研、教學(xué)、醫(yī)療人員及相關(guān)專業(yè)的研究生等均具有重要的參考價(jià)值。由于神經(jīng)病學(xué)、神經(jīng)科學(xué)的實(shí)驗(yàn)研究涉及多個(gè)學(xué)科，對(duì)新的資料很難做到收集齊全，加之我們的編寫(xiě)經(jīng)驗(yàn)有限，在編寫(xiě)過(guò)程中難免有疏漏之處。為此，誠(chéng)望廣大讀者對(duì)此書(shū)的應(yīng)用提出坦誠(chéng)的意見(jiàn)，并予批評(píng)指正。

內(nèi)容概要

本書(shū)在內(nèi)容上繼承并吸收了傳統(tǒng)技術(shù)中的精華，力求與國(guó)際上神經(jīng)科學(xué)新技術(shù)接軌，反映學(xué)科交叉滲透。全書(shū)系統(tǒng)介紹了神經(jīng)病理、神經(jīng)電生理、神經(jīng)生化、神經(jīng)免疫、神經(jīng)毒理、神經(jīng)干細(xì)胞、突觸體、血一腦屏障、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞培養(yǎng)、組織片和立體定向等方面的有關(guān)技術(shù)和方法，同時(shí)介紹了與腦血管疾病密切相關(guān)的血液流變學(xué)、組織血流動(dòng)力學(xué)、腦組織氧監(jiān)測(cè)技術(shù)等檢查方法和臨床神經(jīng)科學(xué)的前沿技術(shù)。書(shū)末附有神經(jīng)科學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)常用數(shù)據(jù)，以備查閱。本書(shū)從基礎(chǔ)理論知識(shí)和神經(jīng)病學(xué)兩個(gè)視角論述臨床神經(jīng)科學(xué)技術(shù)，將基礎(chǔ)理論和臨床實(shí)踐完美結(jié)合。    本書(shū)內(nèi)容翔實(shí)，配有大量的圖表，形象、簡(jiǎn)潔，是一部?jī)?nèi)容新穎而豐富的醫(yī)學(xué)專著，對(duì)神經(jīng)病學(xué)的臨床和科研工作都具有重要參考價(jià)值，適合從事神經(jīng)病學(xué)臨床和科研的專業(yè)人員、醫(yī)學(xué)生以及對(duì)神經(jīng)病學(xué)感興趣的相關(guān)學(xué)科的科研人員參考。

作者簡(jiǎn)介

陳春富，主任醫(yī)師，解放軍總醫(yī)院（301醫(yī)院），神經(jīng)病學(xué)博士。于煤炭總醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科工作。先后在湘雅醫(yī)院、宣武醫(yī)院進(jìn)修醫(yī)學(xué)心理學(xué)、臨床神經(jīng)電生理學(xué)。擅長(zhǎng)腦卒中的危險(xiǎn)因素控制、各類腦血管病的病因診治、卒中單元監(jiān)護(hù)和治療、頸動(dòng)脈和腦動(dòng)脈狹窄或閉塞的診斷，對(duì)神經(jīng)科疑難病例的診斷以及腦損傷的修復(fù)治療方面具有獨(dú)到的見(jiàn)解。多年從事腦血管病、癲癇、癡呆方面的研究，熟練掌握多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，主要研究興趣包括中樞神經(jīng)損傷的再生與修復(fù)、缺血性腦損傷的神經(jīng)保護(hù)治療以及腦血管病注冊(cè)的臨床和社區(qū)研究，至今仍堅(jiān)持從事頭痛、癲癇、白質(zhì)腦病、抑郁癥病例隨訪工作。發(fā)表學(xué)術(shù)論文81篇，其中被SCI收錄2篇。獲科研獎(jiǎng)12項(xiàng)。主編專著多部，為軍區(qū)級(jí)科學(xué)技術(shù)拔尖人才、濟(jì)南軍區(qū)神經(jīng)科專業(yè)委員會(huì)委員。 　　研究方向：腦血管疾病、癲癇。

書(shū)籍目錄

第一章  神經(jīng)病理學(xué)技術(shù)  第一節(jié)  概論  第二節(jié)  病理學(xué)組織固定與染料選擇  第三節(jié)  尸體解剖和活體檢查技術(shù)  第四節(jié)  免疫組織化學(xué)技術(shù)  第五節(jié)  神經(jīng)病理染色技術(shù)  第六節(jié)  肌肉活檢技術(shù)  第七節(jié)  神經(jīng)系統(tǒng)疾病其他相關(guān)染色技術(shù)  第八節(jié)  組織特殊染色法第二章  神經(jīng)電生理學(xué)技術(shù)  第一節(jié)  電生理學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)  第二節(jié)  納米線晶體管探測(cè)神經(jīng)元信號(hào)  第三節(jié)  整體神經(jīng)電生理實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉方法  第四節(jié)  神經(jīng)電生理測(cè)定  第五節(jié)  腦電圖檢查  第六節(jié)  肌電圖檢查  第七節(jié)  運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度檢查  第八節(jié)  長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)的誘導(dǎo)檢查  第九節(jié)  中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞外記錄技術(shù)  第十節(jié)  神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)微電極記錄技術(shù)  第十一節(jié)  微電極導(dǎo)向技術(shù)  第十二節(jié)  自由活動(dòng)動(dòng)物神經(jīng)電生理學(xué)技術(shù)  第十三節(jié)  膜片鉗實(shí)驗(yàn)技術(shù)第三章  神經(jīng)生化方法  第一節(jié)  生物膜的研究方法  第二節(jié)  神經(jīng)系統(tǒng)疾病蛋白質(zhì)組學(xué)  第三節(jié)  離心技術(shù)第四章  活體自動(dòng)采樣系統(tǒng)一微透析技術(shù)  第一節(jié)  概述  第二節(jié)  影響微透析技術(shù)質(zhì)量的因素  第三節(jié)  設(shè)計(jì)微透析實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)  第四節(jié)  微透析技術(shù)的定量問(wèn)題  第五節(jié)  微透析樣品的分析方法  第六節(jié)  微透析技術(shù)與其他實(shí)驗(yàn)技術(shù)的結(jié)合  第七節(jié)  微透析技術(shù)的改進(jìn)  第八節(jié)  腦和脊髓微透析采樣技術(shù)  第九節(jié)  微透析技術(shù)的研究進(jìn)展  第十節(jié)  微透析應(yīng)用的局限性第五章  神經(jīng)遞質(zhì)檢測(cè)方法  第一節(jié)  兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)檢測(cè)技術(shù)  第二節(jié)  氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)檢測(cè)技術(shù)  第三節(jié)  一氧化氮檢測(cè)技術(shù)  第四節(jié)  神經(jīng)遞質(zhì)共存現(xiàn)象免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)  第五節(jié)  針型組織傳感器在體測(cè)定神經(jīng)遞質(zhì)  第六節(jié)  神經(jīng)元膜受體電生理學(xué)及神經(jīng)遞質(zhì)免疫組織化學(xué)檢測(cè)方法第六章  受體學(xué)方法  第一節(jié)  基本概念和研究方法  第二節(jié)  放射性配基受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)  第三節(jié)  配體印跡試驗(yàn)  第四節(jié)  受體放射自顯影技術(shù)  第五節(jié)  核受體檢測(cè)方法  第六節(jié)  受體學(xué)說(shuō)與新藥研究  第七節(jié)  組織切片放射配基結(jié)合分析法  第八節(jié)  受體檢測(cè)實(shí)例  第九節(jié)  非洲爪蟾卵母細(xì)胞表達(dá)大鼠乙酰膽堿受體的方法第七章  神經(jīng)免疫方法  第一節(jié)  免疫酶細(xì)胞化學(xué)  第二節(jié)  免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)  第三節(jié)  免疫細(xì)胞化學(xué)圖像分析  第四節(jié)  免疫膠體金技術(shù)  第五節(jié)  免疫磁性微球技術(shù)  第六節(jié)  免疫電鏡技術(shù)  第七節(jié)  免疫細(xì)胞化學(xué)在神經(jīng)科學(xué)中的應(yīng)用  第八節(jié)  免疫細(xì)胞化學(xué)常用試劑介紹第八章  血液流變學(xué)檢查方法  第一節(jié)  臨床常規(guī)血液流變學(xué)檢查  第二節(jié)  血小板的檢測(cè)方法  第三節(jié)  流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)活化血小板方法學(xué)  第四節(jié)  反相高效液相色譜法測(cè)定人血中血小板活化因子  第五節(jié)  流式細(xì)胞術(shù)與三種檢測(cè)血小板活化方法的比較  第六節(jié)  中性粒細(xì)胞一內(nèi)皮細(xì)胞黏附率第九章  組織血流動(dòng)力學(xué)檢查方法  第一節(jié)  腦血流監(jiān)測(cè)方法概述  第二節(jié)  實(shí)時(shí)對(duì)比超聲定量評(píng)價(jià)腦組織血流灌注  第三節(jié)  CT灌注成像檢查腦血流動(dòng)力學(xué)  第四節(jié)  單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層顯像局部腦血流的定量  第五節(jié)  MRI腦血流定量方法  第六節(jié)  基于小波包技術(shù)的腦血流導(dǎo)納信號(hào)熵特征  第七節(jié)  放射性微球技術(shù)檢測(cè)激素性肌組織血流量  第八節(jié)  腦血流圖檢查  第九節(jié)  腦血流負(fù)荷檢查方法學(xué)  第十節(jié)  腦缺血耐受性的預(yù)測(cè)和價(jià)值  第十一節(jié)  頸動(dòng)脈內(nèi)異戊巴比妥試驗(yàn)  第十二節(jié)  評(píng)估腦循環(huán)的神經(jīng)電生理檢查  第十三節(jié)  腦血管疾病腦循環(huán)儲(chǔ)備力臨床評(píng)價(jià)  第十四節(jié)  清醒大鼠自由活動(dòng)狀態(tài)長(zhǎng)時(shí)間直接測(cè)壓方法第十章  腦組織氧監(jiān)測(cè)技術(shù)  第一節(jié)  腦氧監(jiān)測(cè)的方法學(xué)概述  第二節(jié)  無(wú)創(chuàng)性紅外光譜光電法測(cè)量血氧飽和度  第三節(jié)  腦組織氧分壓微創(chuàng)監(jiān)測(cè)技術(shù)第十一章  細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法  第一節(jié)  細(xì)胞凋亡檢測(cè)技術(shù)  第二節(jié)  細(xì)胞凋亡分期和檢測(cè)方法的選擇第十二章  神經(jīng)干細(xì)胞技術(shù)  第一節(jié)  干細(xì)胞的基本理論  第二節(jié)  神經(jīng)干細(xì)胞概述  第三節(jié)  神經(jīng)干細(xì)胞的基礎(chǔ)研究  第四節(jié)  胚胎神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)  第五節(jié)  神經(jīng)干細(xì)胞的應(yīng)用范圍  第六節(jié)  神經(jīng)干細(xì)胞移植技術(shù)  第七節(jié)  干細(xì)胞生物工程  第八節(jié)  神經(jīng)干細(xì)胞應(yīng)用存在的問(wèn)題第十三章  血-腦屏障方法學(xué)  第一節(jié)  血-腦屏障通透性的測(cè)定方法  第二節(jié)  透血-腦屏障制劑  第三節(jié)  肼跨血-腦屏障轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)力學(xué)研究方法  第四節(jié)  促進(jìn)藥物跨血-腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)載體  第五節(jié)  血-腦屏障功能與中醫(yī)藥研究  第六節(jié)  血-腦屏障體外模型方法第十四章  神經(jīng)病學(xué)研究組織片技術(shù)  第一節(jié)  腦片技術(shù)概述  第二節(jié)  腦片技術(shù)操作流程  第三節(jié)  神經(jīng)病學(xué)研究中腦片技術(shù)的應(yīng)用  第四節(jié)  新生大鼠海馬腦片培養(yǎng)方法  第五節(jié)  新生大鼠大腦皮質(zhì)、紋狀體及中腦黑質(zhì)器官腦片培養(yǎng)  第六節(jié)  海馬腦片谷氨酸遞質(zhì)體外釋放試驗(yàn)  第七節(jié)  圖像分析定量測(cè)量腦片體積  第八節(jié)  大鼠脊髓片器官培養(yǎng)模型  第九節(jié)  大鼠周齡及切片厚度對(duì)脊髓片培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞活性的影響第十五章  突觸體技術(shù)  第一節(jié)  突觸體簡(jiǎn)介  第二節(jié)  突觸體分離制備方法  第三節(jié)  突觸體功能的研究方法  第四節(jié)  突觸體素第十六章  芯片技術(shù)  第一節(jié)  生物芯片技術(shù)概述  第二節(jié)  基因芯片  第三節(jié)  神經(jīng)損傷的基因芯片研究  第四節(jié)  組織芯片  第五節(jié)  神經(jīng)芯片第十七章  立體定向技術(shù)  第一節(jié)  立體定向技術(shù)原理  第二節(jié)  動(dòng)物專用立體定向儀  第三節(jié)  臨床腦立體定向技術(shù)概述  第四節(jié)  腦深部病變立體定向活檢方法  第五節(jié)  立體定向腦內(nèi)組織移植術(shù)  第六節(jié)  肌骨病變CT引導(dǎo)下經(jīng)皮穿刺活檢術(shù)  第七節(jié)  立體定向手術(shù)的常見(jiàn)并發(fā)癥第十八章  神經(jīng)行為方法學(xué)  第一節(jié)  迷宮測(cè)試方法  第二節(jié)  動(dòng)物神經(jīng)功能缺損傳統(tǒng)評(píng)分方法  第三節(jié)  動(dòng)物神經(jīng)行為功能測(cè)試現(xiàn)代方法  第四節(jié)  VideoMot2小動(dòng)物行為觀察系統(tǒng)主要參考文獻(xiàn)附錄神經(jīng)病學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)常用數(shù)據(jù)

章節(jié)摘錄

(四)神經(jīng)干細(xì)胞移植技術(shù)現(xiàn)狀CNS疾病中有很多是因?yàn)槟撤N特定的腦細(xì)胞發(fā)生退行性死亡，導(dǎo)致一些重要的神經(jīng)遞質(zhì)、蛋白質(zhì)因子或某些重要結(jié)構(gòu)的匱乏所致。因此在成功地培養(yǎng)了神經(jīng)干細(xì)胞之后，人們很自然地想到利用它直接進(jìn)行移植治療，或利用病毒載體，攜帶目的基因，導(dǎo)人神經(jīng)干細(xì)胞，將篩選得到的體外高效表達(dá)目的基因的克隆進(jìn)行移植。則中性的細(xì)胞治療方法具有以下優(yōu)點(diǎn)：①神經(jīng)干細(xì)胞在腦中能根據(jù)其周圍微環(huán)境的誘導(dǎo)而分裂，分化成為相應(yīng)的細(xì)胞類型，其形態(tài)和功能與附近的宿主細(xì)胞非常類似。即使是將因轉(zhuǎn)入原癌基因而永生化的神經(jīng)于細(xì)胞植入腦后也未長(zhǎng)出腫瘤。②CNS具備特殊的結(jié)構(gòu)——血腦屏障，這使得淋巴細(xì)胞很難進(jìn)入，因此不同個(gè)體之間，甚至是不同物種之間的神經(jīng)干細(xì)胞移植，都幾乎沒(méi)有排斥反應(yīng)，大大提高了神經(jīng)干細(xì)胞的來(lái)源。③神經(jīng)干細(xì)胞可以在體外根據(jù)不同的需要導(dǎo)入相應(yīng)的外源基因，成為一種光譜的細(xì)胞載體。目前很多研究組根據(jù)神經(jīng)干細(xì)胞的這些特性，從不同角度加以應(yīng)用，在神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療上取得了很大進(jìn)展。近年研究表明，胚胎干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞在體外培養(yǎng)中都可以分化成為神經(jīng)細(xì)胞，并且已經(jīng)在小鼠、大鼠模型移植實(shí)驗(yàn)中取得明顯療效。另外，考慮到這些細(xì)胞取材比較困難，有的學(xué)者將目光轉(zhuǎn)向取材相對(duì)容易的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，這些細(xì)胞可以自體移植以規(guī)避免疫排斥，而且可以轉(zhuǎn)化或分化成神經(jīng)細(xì)胞并產(chǎn)生療效，具有優(yōu)越性。基于這些結(jié)果，人們一度樂(lè)觀地認(rèn)為，細(xì)胞治療的臨床應(yīng)用已經(jīng)指日可待。神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)治療目前常規(guī)方法難以見(jiàn)效的神經(jīng)疾患提供了廣闊的思路和誘人的前景，移植后的康復(fù)技術(shù)可促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的分化和參與神經(jīng)功能重建。由于神經(jīng)干細(xì)胞具有很廣泛的臨床應(yīng)用前景，所以說(shuō)現(xiàn)在全世界都把它作為一個(gè)熱點(diǎn)來(lái)進(jìn)行研究。我國(guó)在神經(jīng)干細(xì)胞研究方面起步非常早，基本上和世界上是同步的。而且由于中國(guó)政府在宏觀政策方面給予非常寬松的政策，在資金上投入也很多，所以，我國(guó)在神經(jīng)干細(xì)胞的研究領(lǐng)域，無(wú)論是技術(shù)還是臨床，都處于比較前沿的位置。臨床移植方式主要為腰椎穿刺蛛網(wǎng)膜下腔植入，創(chuàng)傷輕微，病人痛苦小。二、神經(jīng)干細(xì)胞移植治療腦外傷2001年6月，復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院宣布，他們成功地完成了世界上第一例成人神經(jīng)干細(xì)胞的自體移植。他們收治了一位被銳器刺人腦內(nèi)深達(dá)lOcm、造成嚴(yán)重顱內(nèi)傷的病人。病人認(rèn)知能力受到明顯影響。在給病人手術(shù)前，為了避免細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)干細(xì)胞的影響，特地把神經(jīng)干細(xì)胞保存在病人自身的CSF中。研究人員抽取病人腦內(nèi)的異物后，沖洗異物上附帶的碎片腦組織，進(jìn)行克隆、分離，在病人體外培養(yǎng)出病人的腦神經(jīng)干細(xì)胞。為了檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞的特征，研究人員將克隆的神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行增殖和分化實(shí)驗(yàn)，并移植到有免疫缺陷的裸鼠腦內(nèi)和猴子腦內(nèi)，發(fā)現(xiàn)這些干細(xì)胞具備特有的遷移和分化出其他細(xì)胞的能力。手術(shù)時(shí)，神經(jīng)外科醫(yī)生采用磁共振掃描導(dǎo)向的立體定向技術(shù)，在局部麻醉情況下，將500萬(wàn)個(gè)干細(xì)胞以不同的注射點(diǎn)移植到病人腦內(nèi)。這是一次創(chuàng)傷很小的神經(jīng)干細(xì)胞移植。

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