遺傳修飾小鼠實(shí)用實(shí)驗(yàn)技術(shù)

內(nèi)容概要

《遺傳修飾小鼠實(shí)用實(shí)驗(yàn)技術(shù)》由秦鴻雁、鄭敏華、韓驊主編，是《基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)系列叢書(shū)》的第二分冊(cè)。本書(shū)分為六章，即小鼠的胚胎發(fā)育簡(jiǎn)介，實(shí)驗(yàn)室小鼠的飼養(yǎng)、管理及一般操作，轉(zhuǎn)基因小鼠的建立，基因剔除小鼠的建立，轉(zhuǎn)基因和基因剔除小鼠的分析以及常用小鼠疾病模型建立。希望這本小書(shū)能夠給讀者和使用者從事相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究提供成熟、全面的實(shí)驗(yàn)操作指導(dǎo)與參考。

書(shū)籍目錄

第一章  小鼠的胚胎發(fā)育簡(jiǎn)介
  第一節(jié)  實(shí)驗(yàn)室小鼠概述
  第二節(jié)  生殖細(xì)胞的發(fā)生和受精
  第三節(jié)  卵裂和小鼠胚胎的早期分化
  第四節(jié)  原腸胚發(fā)生
  第五節(jié)  早期器官發(fā)生
  第六節(jié)  胚外組織的發(fā)育
第二章  實(shí)驗(yàn)室小鼠的飼養(yǎng)、管理及一般操作
  第一節(jié)  實(shí)驗(yàn)室小鼠的飼養(yǎng)條件和注意事項(xiàng)
  第二節(jié)  遺傳修飾小鼠的品系特征
  第三節(jié)  小鼠的交配
  第四節(jié)  遺傳修飾小鼠實(shí)驗(yàn)中常用的幾種手術(shù)
第三章  轉(zhuǎn)基因小鼠的建立
  第一節(jié)  轉(zhuǎn)基因載體的構(gòu)建
  第二節(jié)  受精卵的采集和培養(yǎng)
  第三節(jié)  受精卵的顯微注射
第四章  基因剔除小鼠的建立
  第一節(jié)  小鼠基因剔除概述
  第二節(jié)  基因剔除載體的設(shè)計(jì)與構(gòu)建
  第三節(jié)  Es細(xì)胞的培養(yǎng)與建株
  第四節(jié)  在小鼠胚胎干細(xì)胞中進(jìn)行基因打靶
  第五節(jié)  小鼠囊胚的顯微注射
第五章  轉(zhuǎn)基因和基因剔除小鼠的分析
  第一節(jié)  小鼠基因型的判定
  第二節(jié)  常用的基因表達(dá)檢測(cè)方法
  第三節(jié)  組織切片的制作和染色
  第四節(jié)  特殊組織的表型分析
第六章  常用小鼠疾病模型建立
  第一節(jié)  荷瘤小鼠模型
  第二節(jié)  哮喘小鼠模型
  第三節(jié)  小鼠肝臟部分切除模型
  第四節(jié)  小鼠肝臟缺血再灌注損傷模型
  第五節(jié)  小鼠纖維化模型的建立
  第六節(jié)  視網(wǎng)膜病變模型

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁(yè)：   插圖：   （2）小鼠ES細(xì)胞的解凍 程序：①向150cm2和25cm2的培養(yǎng)瓶中加入3ml和10ml 0.1％明膠，均勻地鋪滿培養(yǎng)表面，室溫30rain，注意勿產(chǎn)生氣泡；②吸棄明膠，向150cm2培養(yǎng)中加入30m1EF培養(yǎng)液；③取出一管凍存MMC處理的EF細(xì)胞，放在37℃水浴中解凍，約一半細(xì)胞解凍后轉(zhuǎn)入超凈臺(tái)中，用酒精棉球擦拭管口邊緣和管底；④將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到EF培養(yǎng)液中，再吸出少量培養(yǎng)液洗凈凍存管；⑤混勻，向25cm2培養(yǎng)瓶中轉(zhuǎn)移5ml細(xì)胞懸液，37℃培養(yǎng)8h以上可接種EF細(xì)胞；⑥一管EF細(xì)胞可接種6塊96孔板（每孔100μl），3塊24孔板（每孔 1mJ）；⑦在37℃水浴解凍一管ES細(xì)胞，大約一半細(xì)胞融化時(shí)取出，轉(zhuǎn)人超凈臺(tái)，用酒精棉球擦拭管口邊緣和管底；⑧將解凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)人加有10ml ES培養(yǎng)液的15ml離心管中，吸2ml培養(yǎng)液洗凍存管1次；⑨室溫離心1000r／min，3min；⑩棄上清，敲擊管底使細(xì)胞重懸，加入50μl ES培養(yǎng)液進(jìn)一步懸浮細(xì)胞；吸棄25cm2培養(yǎng)瓶中的EF培養(yǎng)液，把ES細(xì)胞接種于EF細(xì)胞上。 （3）小鼠ES細(xì)胞的凍存方法：①準(zhǔn)備凍存液，90％FCS.10％DMSO，過(guò)濾除菌，4℃保存，24h內(nèi)使用，新配的凍存液會(huì)產(chǎn)熱，所以需水浴降溫后才能使用；②吸棄培養(yǎng)液，用PBS洗1次；③加入胰酶／EDTA，37℃，5 min；④敲打培養(yǎng)皿使細(xì)胞懸浮，加入10m1 ES培養(yǎng)液，吹打使細(xì)胞進(jìn)一步重懸，取10μl細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)細(xì)胞；⑤室溫離心1000r／min，5min；⑥吸棄上清，敲打培養(yǎng)使細(xì)胞重懸；⑦加入凍存液重懸細(xì)胞，5×106／ml；⑧分裝入凍存管，每管1ml，寫(xiě)好標(biāo)簽，放在冰上5min；⑨將細(xì)胞放入盒中，放在—70℃過(guò)夜，轉(zhuǎn)入液氮中保存。 3.小瓶ES細(xì)胞的建株 （1）材料準(zhǔn)備包括：①發(fā)育3.5dpc的小鼠囊胚，或者“滯育”囊胚；②M2培養(yǎng)液，或者DMEM加10％胎牛血清和25mM HEPES（pH7.4）；③lOmm培養(yǎng)板；④飼養(yǎng)細(xì)胞（STO細(xì)胞或小鼠MEF細(xì)胞）；⑤ES細(xì)胞培養(yǎng)液；⑥前端拉尖并封閉的玻璃點(diǎn)滴管；⑦無(wú)鈣鎂PBS；⑧胰酶／EDTA（胰酶0.25％～0.5％，EDTA 0.2％，用PBS配制）；⑨液狀石蠟。 （2）操作過(guò)程包括以下幾個(gè)步驟。

編輯推薦

《遺傳修飾小鼠實(shí)用實(shí)驗(yàn)技術(shù)》給讀者和使用者從事相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究提供成熟、全面的實(shí)驗(yàn)操作指導(dǎo)與參考。

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