出入境動物檢驗檢疫技術研究

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第一章 禽病檢測技術 9株水禽H5N1亞型禽流感病毒株主要基因信息分析 PCR快速檢測鴨病毒性腸炎標準方法的建立 表達H7亞型禽流感HA基因桿狀病毒轉移載體的構建及重組病毒的鑒定 不同動物來源新城疫病毒對不同種屬細胞的感染性分析 產蛋鴨大腸桿菌疾病的檢定及其結果分析 鵝源副粘病毒和新城疫病毒與受體結合動力學比較 鴿源H5N1亞型禽流感病毒株的全基因克隆及序列分析 基因芯片技術檢測新城疫病毒 基于DPV UL6基因主要抗原域蛋白免疫組化方法的建立及其在DPV強毒感染鴨組織中定位分布規(guī)律的檢測 昆蟲／桿狀病毒表達系統(tǒng)規(guī)模化表達禽流感H7HA重組目的蛋白的 利用IBDV VP3蛋白初步建立雞傳染性法式囊病間接El。ISA方法 兩株鵝源H5N1亞型禽流感病毒分離株全基因序列分析 禽流感病毒檢測方法標準比較及在國際能力驗證上應用 禽流感群特異性間接原位RT—PCR檢測方法研究 實時熒光定量PCR快速檢測鴨病毒性腸炎標準方法的建立 西藏拉薩市H5、H9型禽流感血清學監(jiān)測 新城疫病毒融合蛋白的真核表達及其單克隆抗體的研制、應用 鴨病毒性腸炎g8基因的原核表達及產物的抗原性分析 鴨腸炎病毒UL6基因8細胞抗原表位預測、主要抗原域蛋白原核表達及其抗體制備 鴨新城疫病毒山東分離株F基因的克隆和序列分析 第二章豬病檢測技術 應用實時熒光定量TaqManRT—PCR檢測豬水泡病毒的研究 豬水泡病病毒VPl基因的克隆和表達 多重PCR同時檢測鑒別口蹄疫、豬水泡和水泡性口炎病毒 非洲豬瘟病毒VP73基因克隆及在大腸桿菌中的高效表達 進境種豬繁殖與呼吸綜合征病毒快速檢測鑒定初探 口蹄疫通用型實時熒光RT—PCR檢測方法的建立 美洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒及其變異株（NSP2 1 594～1 680變異RT—PCR鑒別檢測方法的建立 豬胸膜肺炎放線桿菌PCR快速分型系統(tǒng)的建立及應用 液相阻斷ELISA和IH檢測O型口蹄疫抗體相關性研究 乙型腦炎病毒NS3基因實時RT—LAMP快速檢測方法的建立 應用實時熒光定量TaqMan RT—PCR檢測口蹄疫病毒的研究 豬Ⅱ型圓環(huán)病毒檢測方法的建立及應用 豬傳染性胃腸炎（TGE）病毒在組織細胞上增殖及其抗體的鑒定研究 豬戊型肝炎病毒ELISA檢測體系建立及其應用 豬細小病毒SCl株非結構蛋白NSl基因的原核表達及PPA—NS1—ELI：建立 …… 第三章牛羊病檢測技術 第四章馬病檢測技術 第五章水生動物病檢測技術 第六章細菌病原體 第七章農獸藥殘留檢測技術 第八章物種鑒定及其他 第九章管理及其他綜述類 第十章其他論文摘要

章節(jié)摘錄

版權頁：   插圖：   1.8 TaqMan RT—PCR的特異性、敏感性和重復性 用FMDV，VSV以及正常BHK一21細胞、野外采集豬的組織樣品和血清進行特異性比較檢測。對SVDV RNA樣品進行l(wèi)0倍系列稀釋，用常規(guī)RT—PCR和TaqMan RT—PCR檢測，比較它們的敏感性。為了評估TaqManRT—PCR檢測SVDV方法中的組內和組間試驗的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性，應用10倍系列稀釋的SVDV RNA反復進行TaqMan RT—PCR檢測，每次試驗的每個樣品做6個平行的反應管，重復6次。 2結果 2.1 TaqMan RT—PCR的特異性擴增分析 應用TaqMan RT—PCR對SVDV、FMDV、VSV、正常BHK21細胞等試驗樣品進行檢測。從每個樣品TaqMan RT—PCR擴增的平均Ct值中可以看出，SVDV都出現(xiàn)實時熒光增長曲線，有強的實時熒光信號，表現(xiàn)為陽性擴增，不同稀釋度的陽性樣品Ct值均小于或等于35.00。FMDV、VSV、BKH一21細胞、豬正常組織陰性樣品和空白對照的Ct值均大于38.0或無Ct值，無擴增曲線，一直為水平線，試驗特異性強，（見圖1）。經對大量陽性和陰性樣品檢測結果的統(tǒng)計分析，確定了Ct值38.0可作為陽性和陰性的臨界值（cut—off）。Ct值大于38.0可判為陰性，Ct值小于或等于35.0可判為陽性，在35.0～38.0之問為可疑，須重新試驗。熒光定量PCR檢測SVDV的特異性強，敏感性高，重復性很好。 2.2 引物和探針及其濃度的篩選 TaqMan RT—PCR反應混合物中引物、探針之間的非特異性分子競爭抑制會影響到擴增效率和敏感性，需要選擇引物和探針的最佳濃度配比，以獲得TaqManRT—PCR反應的最低Ct值和最高&Rn，提高擴增效率和敏感性。

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《出入境動物檢驗檢疫技術研究》以出入境檢驗檢疫科技問題的需求為主線，體現(xiàn)了技術創(chuàng)新與出入境檢驗檢疫相結合、關鍵技術研究與實際應用相結合、重點突破與全面提升相結合的原則，貼合出入境檢驗檢疫行業(yè)的發(fā)展要求，對于提升檢驗檢疫科技領域自主創(chuàng)新的能力，實現(xiàn)我國出入境檢驗檢疫綜合科技實力的跨越式發(fā)展，具有重要意義。

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