中西醫(yī)結(jié)合科研實驗方法學(xué)導(dǎo)讀

內(nèi)容概要

　　陳文列、吳錦忠主編的《中西醫(yī)結(jié)合科研實驗方法學(xué)導(dǎo)讀》是《全國高等院校中西醫(yī)臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)規(guī)劃教材》之一，共分為四篇，第一篇介紹組織顯微結(jié)構(gòu)與細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)研究方法（含光鏡、電鏡、激光掃描共聚焦顯微鏡實驗方法與結(jié)構(gòu)觀察），第二篇介紹細(xì)胞生物學(xué)實驗研究方法（細(xì)胞培養(yǎng)、免疫細(xì)胞分析、血液流變學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)），第三篇介紹生化與分子生物學(xué)實驗研究方法（核酸分析、PCR、分子雜交與克隆、蛋白表達(dá)與提取分析等），第四篇介紹中藥與天然藥物化學(xué)及其活性研究方法（化學(xué)成分指紋圖譜、活性物質(zhì)篩選等）。本書重點介紹實驗方法、技術(shù)（經(jīng)典、常用或新技術(shù)）的理論與操作，具有新穎性、實用性、系統(tǒng)性、可操作性強(qiáng)的特點。
　　《中西醫(yī)結(jié)合科研實驗方法學(xué)導(dǎo)讀》可作為中西醫(yī)結(jié)合專業(yè)碩士和博士研究生教學(xué)用書，以及從事中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)、臨床應(yīng)用基礎(chǔ)及中醫(yī)藥現(xiàn)代化基礎(chǔ)研究者的通用科研實驗指導(dǎo)書。

書籍目錄

總前言
第一篇　組織顯微結(jié)構(gòu)與細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)研究方法
　第一章　組織顯微結(jié)構(gòu)研究的光鏡實驗方法
　　第一節(jié)　組織學(xué)和病理學(xué)常規(guī)實驗方法
　　第二節(jié)　光鏡組織化學(xué)與特殊染色
　　第三節(jié)　光鏡酶組織化學(xué)
　　第四節(jié)　光鏡免疫組織化學(xué)
　　第五節(jié)　光鏡原位雜交組織化學(xué)
　　第六節(jié)　原位凋亡檢測技術(shù)（TUNEL法）
　　第七節(jié)　光鏡顯微鏡圖像定量分析
　第二章　細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)研究的電鏡實驗方法
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　透射電鏡常規(guī)樣品制備
　　第三節(jié)　示蹤與離子電鏡細(xì)胞化學(xué)
　　第四節(jié)　電鏡特殊染色
　　第五節(jié)　電鏡免疫細(xì)胞化學(xué)
　　第六節(jié)　細(xì)胞器標(biāo)志酶電鏡細(xì)胞化學(xué)
　　第七節(jié)　透射電鏡、掃描電鏡與超微結(jié)構(gòu)圖像定量分析
　第三章　細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與組織顯微結(jié)構(gòu)的觀察
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與常見變化
　　第三節(jié)　幾類細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)
　　第四節(jié)　組織顯微結(jié)構(gòu)與常見病變
　第四章　常見器官的組織顯微結(jié)構(gòu)與細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)及病變
　　第一節(jié)　消化器官的顯微結(jié)構(gòu)與超微結(jié)構(gòu)及病變
　　第二節(jié)　運動器官的顯微結(jié)構(gòu)與超微結(jié)構(gòu)及病變
　　第三節(jié)　心血管的顯微結(jié)構(gòu)與超微結(jié)構(gòu)及病變
　　第四節(jié)　內(nèi)分泌器官和組織的顯微結(jié)構(gòu)與超微結(jié)構(gòu)及病變
　　第五節(jié)　神經(jīng)系統(tǒng)的顯微結(jié)構(gòu)與超微結(jié)構(gòu)及病變
　　第六節(jié)　泌尿器官的顯微結(jié)構(gòu)與超微結(jié)構(gòu)及病變
　　第七節(jié)　免疫器官的顯微結(jié)構(gòu)與超微結(jié)構(gòu)及病變
　　第八節(jié)　呼吸器官的顯微結(jié)構(gòu)與超微結(jié)構(gòu)及病變
　　第九節(jié)　血細(xì)胞的顯微結(jié)構(gòu)與超微結(jié)構(gòu)及病變
　第五章　組織和細(xì)胞立體結(jié)構(gòu)與成分研究的激光掃描共聚焦顯微術(shù)
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　熒光探針的選擇和熒光標(biāo)記樣品的制備
　　第三節(jié)　組織和細(xì)胞結(jié)構(gòu)與成分觀察實驗
　　第四節(jié)　細(xì)胞器三維結(jié)構(gòu)觀察實驗
　　第五節(jié)　細(xì)胞生理功能動態(tài)觀察實驗
　　第六節(jié)　激光掃描共聚焦顯微鏡
第二篇　細(xì)胞生物學(xué)實驗研究方法
　第六章　細(xì)胞培養(yǎng)與分析
　　第一節(jié)　細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理與技術(shù)
　　第二節(jié)　細(xì)胞培養(yǎng)的方法
　　第三節(jié)　細(xì)胞的凍存、復(fù)蘇與運輸
　　第四節(jié)　體外培養(yǎng)細(xì)胞的觀察
　　第五節(jié)　細(xì)胞增殖、凋亡分析
　第七章　免疫細(xì)胞的分離與分析
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　免疫細(xì)胞的分離制備
　　第三節(jié)　免疫細(xì)胞的功能分析
　第八章　血液流變學(xué)研究技術(shù)
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　血液黏度檢測
　　第三節(jié)　血小板聚集、黏附功能檢測
　第九章　流式細(xì)胞術(shù)
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　單細(xì)胞懸液的樣本制備
　　第三節(jié)　流式細(xì)胞術(shù)的標(biāo)記方法、結(jié)果分析與意義
　　第四節(jié)　流式細(xì)胞術(shù)在醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中的應(yīng)用
　　第五節(jié)　流式細(xì)胞儀結(jié)構(gòu)和原理
第三篇　生化與分子生物學(xué)實驗研究方法
　第十章　核酸提取分析
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　DNA提取
　　第三節(jié)　RNA提取
　　第四節(jié)　核酸分析
　　第五節(jié)　核酸電泳
　第十一章　分子雜交
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　Southern印跡雜交
　　第三節(jié)　Northern印跡雜交
　　第四節(jié)　Western印跡雜交
　第十二章　聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　PCR技術(shù)基本操作
　　第三節(jié)　RT—PCR
　　第四節(jié)　PCR引物設(shè)計
　第十三章　分子克隆
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　目的DNA片段的獲取
　　第三節(jié)　目的DNA片段的處理、純化及鑒定
　　第四節(jié)　載體的選擇與處理
　　第五節(jié)　載體與目的基因片段的連接
　　第六節(jié)　重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸埃希菌
　　第七節(jié)　重組克隆子的篩選與鑒定
　第十四章　蛋白表達(dá)
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　外源基因在大腸埃希菌中的誘導(dǎo)表達(dá)
　　第三節(jié)　外源基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)（細(xì)胞轉(zhuǎn)染）
　第十五章　蛋白質(zhì)的提取和分析
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　蛋白的分離提取、純化
　　第三節(jié)　總蛋白含量測定
　　第四節(jié)　酶聯(lián)免疫分析
　　第五節(jié)　放射免疫分析
　　第六節(jié)　蛋白電泳
　第十六章　常規(guī)生物化學(xué)實驗技術(shù)
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　糖類實驗分析
　　第三節(jié)　酶類實驗分析
　　第四節(jié)　脂類實驗分析
第四篇　中藥與天然藥物化學(xué)及其活性研究方法
　第十七章　中藥與天然藥物化學(xué)成分的一般研究方法
　　第一節(jié)　中藥與天然藥物化學(xué)成分提取
　　第二節(jié)　中藥與天然藥物化學(xué)成分分離
　　第三節(jié)　中藥與天然藥物化學(xué)成分的研究各論
　第十八章　中藥與天然藥物化學(xué)成分指紋圖譜研究方法
　　第一節(jié)　構(gòu)建中藥與天然藥物化學(xué)成分指紋圖譜的技術(shù)要求
　　第二節(jié)　應(yīng)用HPLC構(gòu)建草珊瑚化學(xué)成分指紋圖譜的研究實例
　第十九章　中藥與天然藥物活性物質(zhì)篩選方法
　　第一節(jié)　生物活性導(dǎo)向分離法篩選中藥與天然藥物活性物質(zhì)
　　第二節(jié)　計算機(jī)模擬技術(shù)篩選中藥與天然藥物活性物質(zhì)
　　第三節(jié)　中藥與天然藥物化學(xué)成分的生物活性測試法
　　第四節(jié)　中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究方法
彩圖

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁：插圖：1.取材（1）主要實驗儀器／器材／重要試劑1）儀器或器材：剪刀、鑷子、單面刀片或雙面刀片、標(biāo)本瓶、標(biāo)簽等。2）試劑：麻醉劑、生理鹽水等。（2）實驗操作1）預(yù)先準(zhǔn)備好固定液（見固定章節(jié)），分裝在標(biāo)本瓶內(nèi)，貼好標(biāo)簽。2）動物組織取材：將動物麻醉或處死，暴露所需的器官；用鋒利的刀片切下所需器官或組織，進(jìn)行初步修切后，盡快投人固定液。3）細(xì)胞取材：①涂片法。血液等可直接均勻涂在載玻片上，胸腔積液、腹水、尿液、腦脊液以及懸浮的培養(yǎng)細(xì)胞等細(xì)胞濃度小的標(biāo)本，應(yīng)先用離心機(jī)以1500r／rain離心10min，取沉淀涂片，干燥后固定。②爬片法。貼壁細(xì)胞可直接培養(yǎng)在蓋玻片上，固定后染色。③包埋法。離心后固定細(xì)胞團(tuán)，或用瓊脂預(yù)包埋細(xì)胞后，再行常規(guī)脫水，石蠟包埋。（3）注意事項、出現(xiàn)問題與解決辦法1）取材刀具：取材刀具必須鋒利。切取標(biāo)本不應(yīng)擠壓和揉擦，不應(yīng)使用有鉤鑷子或血管鉗等手術(shù)器械鑷取標(biāo)本，以免損害組織造成人為的組織變化。2）取材時間：取材要及時，并及時固定，越新鮮越好。3）取材順序：根據(jù)死后組織結(jié)構(gòu)改變的速度快慢而定。先腹腔后胸腔，先消化管后肝、脾等多血的器官，然后是神經(jīng)組織、骨和皮膚等。4）取材部位及切面方向：組織塊應(yīng)包括各臟器的重要結(jié)構(gòu)和主要病變部位，體積大和分葉的器官視不同組織取多個部位。病理組織最好選取病變與正常組織交界處，以便對比；取材時應(yīng)取最有利于觀察上述部位的切面方向。如腎臟組織應(yīng)包括皮質(zhì)、髓質(zhì)和腎盂；長骨縱切可將其組織結(jié)構(gòu)完整展現(xiàn)；纖維組織、肌肉組織、胃腸道、氣管等取材時盡可能按與纖維和肌肉平行走向切取為佳，避免斜切或無規(guī)律切取。5）取材大小及數(shù)量：組織塊力求小而薄，一般標(biāo)本，以不超過1.5 cm×1.5 cm×0.5 cm為宜，體積小的組織，如甲狀腺和腎上腺可整體取材固定；用于免疫組化染色的組織塊宜更小而薄；冰凍切片組織塊可略厚。較容易發(fā)脆的組織，如甲狀腺、肝臟、血塊、淋巴結(jié)、大塊癌組織等可適當(dāng)厚一些，而脂肪組織、肺組織、纖維性腫瘤、平滑肌瘤等致密的或試劑不易滲人的組織應(yīng)取薄一些。組織塊的數(shù)量依具體情況而定，一般以滿足相關(guān)研究需要為準(zhǔn)。一6）盡量保持組織的原有形態(tài)，防止其彎曲扭轉(zhuǎn)。對神經(jīng)、肌肉、皮膚等組織則可將其兩端用線扎在木片或硬紙片上固定。胃腸、胰腺等組織，應(yīng)先平展于草紙上黏著以后，慢慢地放入固定液中。標(biāo)本上附著的軟組織，如脂肪等，應(yīng)在不影響觀察的原則下，盡量剝?nèi)セ蚯谐?。組織塊上如有血液、黏液、污物等，應(yīng)先用生理鹽水沖洗，然后再投入固定液。7）骨組織或組織內(nèi)的鈣化灶，應(yīng)在固定之后進(jìn)行脫鈣，再行修切。2.固定（1）主要實驗儀器／器材／重要試劑1）10％緩沖甲醛固定液：甲醛100ml，蒸餾水900ml，NaH2PO4·H204g，Na2HPO4（無水）6.5g。2）4％多聚甲醛固定液：多聚甲醛40g，蒸餾水600ml，加熱，邊加適量的NaOH慢慢溶解后，將pH調(diào)至7.2 ～7.4 ，加入NaH2P04·H204g，Na2HP04（無水）6.5 g，蒸餾水定容到1000ml。（2）實驗操作1）組織放入固定液后，常溫放置24～48h。2）根據(jù)組織塊大小，流水沖洗數(shù)小時后再進(jìn)行后續(xù)操作。

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