基因工程

內(nèi)容概要

　　《基因工程》論述了基因工程技術(shù)的基本原理和基因工程在生物制藥中的研究和應(yīng)用?！痘蚬こ獭穬?nèi)容包括基因工程概述，基因工程中常用的工具酶，基因工程常用的基因克隆載體，目的基因的制取，目的基因與克隆載體的體外重組，重組克隆載體引入受體細(xì)胞，含目的基因重組體的篩選、鑒定與分析，目的基因在宿主細(xì)胞中的表達(dá)，無性繁殖系的組建，基因工程藥物的生產(chǎn)和基因工程藥物的檢驗等?！　　痘蚬こ獭吩趦?nèi)容上除了對有關(guān)基因工程基本原理部分的論述外，還詳細(xì)介紹了基因工程在生物制藥領(lǐng)域的研究和應(yīng)用。《基因工程》既適合于作為生物工程、生物技術(shù)、生物制藥和相關(guān)專業(yè)本科生的教材，也適合于作為發(fā)酵工程、生物化工專業(yè)碩士研究生的教材，同時也可供從事生物技術(shù)工作的人員參考。 

書籍目錄

1  基因工程概述1.1  基因工程概貌1.1.1  基因工程的誕生和興起1.1.2  基因工程的特點與基本步驟1.1.3  基因工程早期的開創(chuàng)性研究成就1.2  基因工程技術(shù)的應(yīng)用與發(fā)展趨勢1.2.1  全球性的基因工程爭奪戰(zhàn)1.2.2  蛋白質(zhì)工程的研究開發(fā)飛速發(fā)展1.2.3  轉(zhuǎn)基因動植物生產(chǎn)藥物的研究迅速崛起1.2.4  醫(yī)學(xué)科學(xué)研究取得巨大成就1.2.5  基因治療技術(shù)取得重大進(jìn)展1.2.6  規(guī)?？涨暗膰H《人類基因組計劃》提前完成1.3  基因工程與生物制藥1.3.1  基因工程制藥發(fā)展態(tài)勢1.3.2  主要基因工程藥物簡介2  基因工程常用的工具酶2.1  限制性核酸內(nèi)切酶2.1.1  限制酶的發(fā)現(xiàn)2.1.2  限制酶的種類2.1.3  限制酶的命名2.1.4  Ⅱ型限制酶的特性2.1.5  限制片段末端連接2.2  DNA連接酶2.2.1  DNA連接酶連接作用的特點2.2.2  基因工程中常用的連接酶2.2.3  DNA連接酶連接作用的分子機理2.3  DNA聚合酶2.3.1  大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ2.3.2  K1enow大片段酶2.3.3  T4噬茵體DNAR聚合酶2.3.4  經(jīng)修飾的T7噬茵體DNA聚合酶2.3.5  TaqDNA聚合酶及Ampli TaqTMDNA聚合酶2.3.6  反轉(zhuǎn)錄酶2.4  DNA修飾酶2.4.1  末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶2.4.2  堿性磷酸酶2.4.3  T4噬菌體多核苷酸激酶2.5  單鏈核酸內(nèi)切酶2.5.1  Sl核酸酶2.5.2  Bal31核酸酶2.6核酸外切酶2.6.1  核酸外切酶Ⅶ2.6.2  核酸外切酶Ⅲ2.6.3  λ核酸外切酶3  基因工程常用的克隆載體3.1  質(zhì)粒載體3.1.1  質(zhì)粒概述3.1.2  質(zhì)粒DNA分子的特性3.1.3  質(zhì)粒載體的改造和構(gòu)建3.1.4  DBR322質(zhì)粒載體3.1.5  DUC質(zhì)粒載體3.1.6  其他重要的質(zhì)粒載體3.2  λ噬菌體載體3.2.1  λ噬菌體的基本特性3.2.2  λ噬菌體基因組的結(jié)構(gòu)與功能3.2.3  λ噬菌體載體的構(gòu)建3.2.4  常用的λ噬菌體載體3.2.5  改良型λ噬菌體載體3.3  粘粒載體3.3.1  粘粒載體的構(gòu)建3.3.2  粘粒載體的特點3.3.3  常用的粘粒載體3.4  M13噬菌體載體3.4.1  M13噬菌體的基本特性3.4.2  M13噬菌體載體的構(gòu)建3.4.3  M13噬茵體載體系列的優(yōu)點3.5  噬菌粒載體3.5.1  pUC118和pUCll9噬菌粒載體3.5.2  pBluescript噬菌粒載體3.6  哺乳動物細(xì)胞載體系統(tǒng)3.6.1  SV40載體3.6.2  牛乳頭瘤病毒（BPV）載體3.6.3  EBV病毒載體4目的基因的制取4.1  目的基因的化學(xué)合成4.1.1  目的基因的設(shè)計4.1.2  寡聚核苷酸片段的合成4.1.3  寡核苷酸片段的分離和純化4.1.4  用寡核苷酸片段組裝目的基因4.1.5  化學(xué)合成寡核苷酸的其他用途4.2  構(gòu)建基因文庫法分離目的基因4.2.1  構(gòu)建基因文庫法分離目的基因的基本步驟4.2.2  真核基因組DNA文庫的構(gòu)建過程4.3  酶促合成法制取目的基因4.3.1  真核生物細(xì)胞中的mRNA4.3.2  從構(gòu)建的cDNA文庫中篩選目的cDNA4.3.3  RT-PCR法合成目的cDNA5  目的基因與克隆載體的體外重組5.1  目的基因與質(zhì)粒載體的連接5.1.1  粘性末端連接法5.1.2  定向克隆法5.1.3  平末端連接法5.1.4  同聚物加尾法5.1.5  加人工接頭連接法5.1.6  加DNA銜接物連接法5.1.7  其他轉(zhuǎn)換末端形式連接法5.2  目的基因與入噬菌體載體的連接5.2.1  λ噬茵體載體臂DNA的制備5.2.2  λ噬菌體載體臂與外源目的DNA片段的連接6  重組克隆載體引入受體細(xì)胞6.1  基因工程受體細(xì)胞6.1.1  受體細(xì)胞的特性6.1.2  重組體分子導(dǎo)入受體細(xì)胞的途徑6.2  重組體DNA分子的轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染6.2.1  用氯化鈣制備新鮮的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化法6.2.2  用復(fù)合劑制備感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化法6.2.3  高壓電穿孔轉(zhuǎn)化法（電轉(zhuǎn)化法）6.3  重組λ噬菌體DNA的體外包裝與轉(zhuǎn)導(dǎo)6.3.1  λ噬茵體體外包裝的基本原理6.3.2  λ噬菌體DNA的體外包裝6.3.3  包裝提取物的制備6.3.4  重組λDNA的體外包裝與感染方法6.4  重組克隆載體導(dǎo)人哺乳動物細(xì)胞的轉(zhuǎn)染6.4.1  磷酸鈣和DNA共沉淀物轉(zhuǎn)染法6.4.2  DEAE-葡聚糖介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法6.4.3  利用Polybrene（聚季銨鹽）的DNA轉(zhuǎn)染法6.4.4  利用原生質(zhì)體融合的DNA轉(zhuǎn)染法6.4.5  電穿孔法DNA轉(zhuǎn)染7  含目的基因重組體的篩選、鑒定與分析7.1  重組體（菌）的篩選7.1.1  抗生素抗性基因插入失活法7.1.2  β-半乳糖苷酶基因插入失活法7.1.3  快速細(xì)胞破碎與凝膠電泳篩選法7.1.4  放射性標(biāo)記核酸探針雜交篩選法7.1.5  免疫化學(xué)篩選法7.2  重組體的鑒定7.2.1  酶切及凝膠電泳鑒定法7.2.2  Southern印跡雜交法7.2.3  電鏡R-環(huán)檢測法7.2.4  基因產(chǎn)物鑒定法7.3  重組DNA的序列分析7.3.1  sanger-雙脫氧鏈終止法DNA測序7.3.2  Maxam-Gilbert化學(xué)修飾法DNA測序7.3.3  快速自動化DNA測序8  目的基因在宿主細(xì)胞中的表達(dá)8.1  外源目的基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)8.1.1  原核基因表達(dá)載體的構(gòu)成8.1.2  常見的原核細(xì)胞表達(dá)載體系統(tǒng)8.1.3  外源目的基因在原核細(xì)胞的表達(dá)形式8.1.4  在原核細(xì)胞中高效表達(dá)目的基因8.1.5  基因定點誘變技術(shù)8.2  外源目的基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)8.2.1  真核細(xì)胞表達(dá)載體的功能元件8.2.2  酵母茵表達(dá)系統(tǒng)8.2.3  哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)9  基因工程藥物無性繁殖系的組建9.1  人胰島素原融合蛋白重組菌的組建9.1.1  重組表達(dá)質(zhì)粒pJG202的構(gòu)建與鑒定9.1.2  重組質(zhì)粒pJG202在大腸桿菌中的表達(dá)9.1.3  融合蛋白后處理成為人胰島素原9.2  人a2b型干擾素工程菌的組建9.2.1  hIFN-a2b基因的獲得9.2.2  重組表達(dá)質(zhì)粒pMZI2B的構(gòu)建9.2.3  人a2b型干擾素工程菌的形成與基因的表達(dá)9.3  集落刺激因子工程菌的組建9.3.1  細(xì)胞總RNA的提取9.3.2  PCR引物的設(shè)計與合成9.3.3  RT-PCR法制備GM-CSF cDNA9.3.4  GM-CSF重組表達(dá)載體與工程菌的組建9.4  白細(xì)胞介素融合蛋白工程菌的組建9.4.1  質(zhì)粒與PCR引物9.4.2  人IL-2 cDNA和PE基因的末端改造9.4.3  IL2-PE-pLY5重組質(zhì)粒的構(gòu)建9.5  乙型肝炎表面抗原重組酵母的組建9.5.1  BsAg基因重組表達(dá)質(zhì)粒pLS1和pLS2的構(gòu)建9.5.2  重組表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化及HBsAg的表達(dá)9.5.3  重組表達(dá)質(zhì)粒在酵母細(xì)胞中的穩(wěn)定性9.6  人組織型纖溶酶原激活劑細(xì)胞株的組建9.6.1  真核表達(dá)質(zhì)粒pLFrGGI的構(gòu)建9.6.2  高效表達(dá)FrGGI（tPA突變體）的CHO細(xì)胞株的獲得9.6.3  去除dhfr基因轉(zhuǎn)錄增強子的作用9.7  紅細(xì)胞生成素CHO細(xì)胞株的組建9.7.1  質(zhì)粒與細(xì)胞株9.7.2  EPO真核重組表達(dá)質(zhì)粒pMGL4的構(gòu)建9.7.3  重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞及產(chǎn)物表達(dá)9.7.4  重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHO-dhfr-細(xì)胞及EPO表達(dá)9.8  人腫瘤壞死因子昆蟲細(xì)胞株的組建9.8.1  含hTNF-a基因的重組質(zhì)粒的構(gòu)建9.8.2  共轉(zhuǎn)染與重組病毒的獲得9.8.3  重組病毒感染Sf2l細(xì)胞及hTNF-a的表達(dá)10  基因工程藥物的生產(chǎn)10.1  基因工程菌（細(xì)胞）的培養(yǎng)與發(fā)酵10.1.1  工程細(xì)菌的培養(yǎng)與發(fā)酵10.1.2  工程酵母的培養(yǎng)與發(fā)酵10.1.3  工程細(xì)胞的培養(yǎng)與發(fā)酵10.2  基因工程藥物的分離純化10.2.1  影響分離純化工藝設(shè)計的主要因素10.2.2  各種產(chǎn)物表達(dá)形式采用的分離純化方法10.3  基因工程藥物的分離純化實例10.3.1  以包涵體形式表達(dá)的rGM-CSF中試分離純化10.3.2  以分泌型表達(dá)的人a1-干擾素的分離純化10.3.3  以可溶性形式表達(dá)的rhG-CSF的分離純化10.3.4  在酵母中表達(dá)的HBsAg的分離純化11  基因工程藥物的檢驗11.1  基因工程藥物的質(zhì)量控制11.1.1  主要的基因工程藥物11.1.2  基因工程藥物的特點11.1.3  基因工程藥物的質(zhì)量要求11.1.4  基因工程藥物的質(zhì)控要點11.1.5  基因工程藥物的制造及檢定規(guī)程11.2  基因工程藥物常用的檢驗方法11.2.1  化學(xué)檢定法11.2.2  肽圖分析法11.2.3  外源性DNA殘留量的測定11.2.4  宿主細(xì)胞蛋白雜質(zhì)的檢測11.2.5  無菌試驗11.2.6  內(nèi)毒素試驗11.2.7  異常毒性試驗11.2.8  熱原質(zhì)試驗11.2.9  生物學(xué)活性（效價）檢定11.3  主要基因工程藥物的檢驗11.3.1  重組人胰島素的檢驗11.3.2  重組人生長激素的檢驗11.3.3  重組人干擾素的檢驗11.3.4  重組人白細(xì)胞介素的檢驗11.3.5  重組人紅細(xì)胞生成素的檢驗11.3.6  重組人集落刺激因子的檢驗11.3.7  重組人組織型纖溶酶原激活劑的檢驗11.3.8  重組人腫瘤壞死因子的檢驗11.3.9  重組乙型肝炎疫苗的檢驗附錄參考文獻(xiàn)

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