蛋白質(zhì)高效表達(dá)技術(shù)

內(nèi)容概要

蛋白質(zhì)高效表達(dá)是從事生物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物技術(shù)、生物醫(yī)藥等基礎(chǔ)和應(yīng)用研究的科研人員必須涉及和面對的基本技術(shù)問題。本書作為一本蛋白質(zhì)高效表達(dá)的工具書，將常見的基因高效表達(dá)系統(tǒng)及其相關(guān)要點和經(jīng)驗進行總結(jié)，具有以下內(nèi)容特色：
涵蓋了大腸桿菌、酵母、芽孢桿菌、哺乳動物、轉(zhuǎn)基因動物、轉(zhuǎn)基因植物等主要基因表達(dá)系統(tǒng)；
專門章節(jié)論述重組蛋白的分離純化和復(fù)性這一重要問題；
內(nèi)容較精要，匯集了蛋白質(zhì)科學(xué)工作者的工作經(jīng)驗，實用性較強。
本書可供分子生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、藥學(xué)等領(lǐng)域的教學(xué)和研究人員參考閱讀。

作者簡介

　　華子春，南京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院副院長，教授，博士生導(dǎo)師，醫(yī)藥生物技術(shù)國家重點實驗室主任。長期從事多肽藥物的蛋白質(zhì)工程和基因工程，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系、細(xì)胞凋亡信號傳導(dǎo)途徑的整合研究。

書籍目錄

第一章　大腸桿菌表達(dá)體系
　第一節(jié)　原核表達(dá)載體
　　一、pET載體
　　二、pKK223?3載體
　　三、IMPACTTM系統(tǒng)載體和pMALTM系統(tǒng)載體
　　四、pWIN表達(dá)系統(tǒng)
　　五、pGEX系統(tǒng)
　第二節(jié)　原核表達(dá)宿主菌
　第三節(jié)　選擇構(gòu)建載體的策略
　第四節(jié)　重組蛋白的溶解性
　第五節(jié)　增加蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的策略
　　一、宿主菌選擇
　　二、分泌型表達(dá)
　　三、包含體
　第六節(jié)　大腸桿菌表達(dá)體系的基本操作流程
　　一、基因片段的制備
　　二、載體制備
　　三、載體酶切消化反應(yīng)和從凝膠進行載體的純化和回收
　　四、制備插入片段
　　五、將基因片段克隆到表達(dá)載體
　　六、篩選陽性克隆、測序分析
　　七、轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌及誘導(dǎo)和優(yōu)化目的蛋白表達(dá)
　　八、培養(yǎng)放大及目的蛋白的純化
第二章　重組蛋白的分離純化和復(fù)性
　第一節(jié)　概述
　第二節(jié)　分離純化的方法策略及其應(yīng)用
　第三節(jié)　包含體蛋白質(zhì)的折疊復(fù)性
　　一、 蛋白質(zhì)折疊的過程和機理
　　二、包含體的分離和溶解
　　三、溶解后包含體蛋白質(zhì)的折疊復(fù)性
　第四節(jié)　可溶重組分子的分離純化
　　一、色譜技術(shù)在分離純化中的應(yīng)用
　　二、親和標(biāo)簽在重組蛋白分離純化中的應(yīng)用
　第五節(jié)　結(jié)語
第三章　酵母表達(dá)系統(tǒng)
　第一節(jié)　幾種主要酵母表達(dá)系統(tǒng)
　　一、釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)
　　二、甲醇營養(yǎng)型酵母表達(dá)系統(tǒng)
　　三、 裂殖酵母表達(dá)系統(tǒng)
　　四、 乳酸克魯維亞酵母表達(dá)系統(tǒng)
　　五、其他酵母表達(dá)系統(tǒng)
　第二節(jié)　酵母表達(dá)載體概況
　　一、酵母載體的類型
　　二、酵母載體的基本結(jié)構(gòu)
　第三節(jié)　酵母表達(dá)系統(tǒng)的研究方向
　　一、提高外源蛋白在酵母中的表達(dá)水平
　　二、提高外源基因表達(dá)產(chǎn)物的質(zhì)量
　第四節(jié)　酵母表達(dá)系統(tǒng)的應(yīng)用和展望
第四章　芽孢桿菌基因表達(dá)系統(tǒng)
　第一節(jié)　芽孢桿菌基因表達(dá)系統(tǒng)的特點
　第二節(jié)　芽孢桿菌表達(dá)載體
　　一、自主復(fù)制質(zhì)粒
　　二、整合質(zhì)粒
　　三、噬菌體
　　四、轉(zhuǎn)化方法
　第三節(jié)　宿主菌
　第四節(jié)　外源基因在芽孢桿菌中的分泌表達(dá)
　第五節(jié)　芽孢桿菌高效表達(dá)外源基因的策略及發(fā)展方向
　　一、降低芽孢桿菌胞外蛋白酶活性
　　二、提高表達(dá)質(zhì)粒在細(xì)胞中的穩(wěn)定性
　　三、擴大芽孢桿菌宿主/載體表達(dá)系統(tǒng)
第五章　哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)
　第一節(jié)　哺乳動物細(xì)胞表達(dá)載體
　　一、 表達(dá)載體基本種類與組成元件
　　二、篩選標(biāo)記基因
　第二節(jié)　常見的生產(chǎn)用細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)
　　一、CHO表達(dá)系統(tǒng)
　　二、鼠骨髓瘤細(xì)胞系
　　三、COS細(xì)胞
　　四、Vero細(xì)胞
　第三節(jié)　大規(guī)模哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)的新趨勢
　　一、抑制細(xì)胞凋亡
　　二、可誘導(dǎo)表達(dá)
　　三、新的生產(chǎn)工藝
第六章　轉(zhuǎn)基因動物表達(dá)系統(tǒng)
　第一節(jié)　制作轉(zhuǎn)基因動物常用方法
　第二節(jié)　同源重組介導(dǎo)的基因打靶
　第三節(jié)　組織特異性表達(dá)——乳腺表達(dá)的調(diào)控元件
　　一、乳汁酪蛋白
　　二、乳清酸蛋白
　　三、β?乳球蛋白基因
　第四節(jié)　顯微注射法制備轉(zhuǎn)基因小鼠技術(shù)
　　一、注射DNA的純化和定量
　　二、轉(zhuǎn)基因?qū)嶒炗檬蟮姆N類
　　三、超數(shù)排卵、受精卵收集和培養(yǎng)
　　四、顯微注射
　　五、胚胎移植
　　六、檢測
　第五節(jié)　問題與展望
第七章　轉(zhuǎn)基因植物生物反應(yīng)器
　第一節(jié)　引言
　第二節(jié)　轉(zhuǎn)基因植物的原理與方法
　　一、概述
　　二、轉(zhuǎn)基因植物的選擇
　　三、農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)
　　四、病毒載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)
　　五、直接轉(zhuǎn)化法獲得轉(zhuǎn)基因植物
　第三節(jié)　適于重組蛋白表達(dá)的植物宿主
　　一、煙草
　　二、谷類和豆類作物
　　三、水果和蔬菜
　第四節(jié)　轉(zhuǎn)基因植物表達(dá)重組蛋白研究進展
　　一、轉(zhuǎn)基因植物可食疫苗研究
　　二、轉(zhuǎn)基因植物抗體工程
　第五節(jié)　葉綠體轉(zhuǎn)基因工程
　　一、葉綠體基因組的特征
　　二、葉綠體轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的優(yōu)越性
　　三、外源基因?qū)肴~綠體的方法
　　四、 葉綠體中表達(dá)外源基因的研究進展
　　五、存在問題與解決策略
　　六、葉綠體遺傳轉(zhuǎn)化的前景和展望
　第六節(jié)　轉(zhuǎn)基因植物安全標(biāo)記基因的使用及抗性基因的剔除
　　一、轉(zhuǎn)基因植物使用的安全標(biāo)記基因
　　二、轉(zhuǎn)基因植物中抗性基因的剔除
　　三、展望
　第七節(jié)　理性認(rèn)識轉(zhuǎn)基因植物的安全問題
　　一、轉(zhuǎn)基因植物食品的安全問題
　　二、轉(zhuǎn)基因植物的生態(tài)安全問題
參考文獻

圖書封面

圖書標(biāo)簽Tags

無

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