生物文庫技術(shù)

內(nèi)容概要

本書的作者經(jīng)過多年努力，建立和改良了多種噬菌體展示和SELEX技術(shù)平臺(tái)，并利用上述技術(shù)平臺(tái)開展了針對(duì)感染、炎癥、腫瘤和生物毒素等方面的新型診斷或治療藥物以及基礎(chǔ)方面的研究，取得了良好的結(jié)果。此書是根據(jù)作者實(shí)際工作經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合具體篩選實(shí)例編寫而成，特別編入作者的經(jīng)驗(yàn)借鑒與注意事項(xiàng)，為讀者提供了較詳盡的參考技術(shù)路線和具體操作方法，盡量使具有一定生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)的科技人員能夠快速掌握噬菌體展示和SELEX技術(shù)。
本書由邵寧生、楊光等編著。

書籍目錄

上篇 噬菌體表面展示技術(shù)原理及其操作指南
　第1章 概述
　 一、噬菌體表面展示隨機(jī)肽庫
　 二、噬菌體抗體庫
　 三、噬菌體表面展示技術(shù)篩選原理和基本方法
　 四、噬菌體表面展示技術(shù)的應(yīng)用
　第2章 噬菌體表面展示肽庫技術(shù)操作指南
　 一、試劑
　 二、實(shí)驗(yàn)步驟
　 三、影響篩選的因素
　 四、結(jié)果判斷和分析
　第3章 噬菌體肽庫構(gòu)建及篩選實(shí)例
　 實(shí)例1 基于昆蟲防御素A蛋白分子的噬菌體展示構(gòu)象肽庫的構(gòu)建
　 實(shí)例2 重組hTNF-α結(jié)合肽的篩選
　 實(shí)例3 馬抗SARS-CoV多抗抗原表位的篩選
　第4章 噬菌體抗體庫技術(shù)操作指南
　 一、試劑
　 二、實(shí)驗(yàn)步驟
　 三、影響篩選的因素
　第5章 噬菌體抗體庫構(gòu)建及篩選實(shí)例
　 一、引物
　 二、淋巴細(xì)胞總RNA的提取及VH和VL基因的擴(kuò)增
　 三、初級(jí)噬菌體抗體庫的構(gòu)建
　 四、通過Cre-loxP位點(diǎn)特異性重組構(gòu)建大容量噬菌體抗體庫
　 五、噬菌體抗體庫的篩選
　 六、噬菌體抗體的鑒定及序列分析
下篇 SELEX技術(shù)原理及其操作指南
　第1章 概述
　 一、SELEX技術(shù)的基本技術(shù)路線
　 二、SELEX篩選的特點(diǎn)
　 三、SELEX的應(yīng)用
　 四、適配子的改造
　第2章 SELEX技術(shù)操作指南
　 一、試劑與設(shè)備
　 二、文庫/文庫模板和引物的設(shè)計(jì)與合成
　 三、RNA文庫的獲得（PCR、體外轉(zhuǎn)錄與RNA回收）
　 四、文庫與靶分子孵育
　 五、結(jié)合寡核苷酸分子的分離
　 六、反轉(zhuǎn)錄
　 七、PCR
　 八、下一輪篩選用文庫的制備
　 九、重復(fù)篩選
　 十、篩選后獲得的特異aptamer的分析
　第3章 SELEX技術(shù)篩選實(shí)例
　 實(shí)例1 牛凝血酶特異的RNA aptamer的篩選
　 實(shí)例2 CE-SELEX篩選技術(shù)
　 實(shí)例3 親和層析SELEX篩選促紅細(xì)胞生成素適配體及基于分子信標(biāo)檢測方法的建立
　 實(shí)例4 親和層析SELEX篩選相思子毒素適配體及其在分析檢測中的應(yīng)用
　 實(shí)例5 以完整細(xì)胞為靶的消減SELEX篩選
　 實(shí)例6 腫瘤組織切片-SELEX技術(shù)篩選臨床標(biāo)本分子探針
　 實(shí)例7 組合aptamer用于金黃色葡萄球菌檢測的研究

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁：插圖：天然蛋白由多個(gè)抗原表位組成，而主要的抗原決定簇通常存在于蛋白抗原表面，它們能夠特異結(jié)合針對(duì)該蛋白抗原的大部分抗體，因此被稱為“免疫顯性基團(tuán)”。這些免疫顯性基團(tuán)常由極性或帶電荷的氨基酸殘基組成，并具有高親水性，而這樣的氨基酸序列也是蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)間相互作用位點(diǎn)的特征。典型的水溶性球蛋白的空間構(gòu)象為疏水性殘基埋藏在蛋白質(zhì)內(nèi)部構(gòu)成其核心，而表面由親水性殘基組成。由親水性殘基構(gòu)成的各個(gè)局部區(qū)域中，表面電荷及極性最大的區(qū)域通常為蛋白質(zhì)表位所在區(qū)域。蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)與蛋白質(zhì)的表位分布也有較大關(guān)系。α螺旋、β折疊結(jié)構(gòu)規(guī)則，通過氫鍵維持，結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定不易形變，且經(jīng)常處于蛋白質(zhì)的內(nèi)部，因而很少有機(jī)會(huì)與其他分子作用。而B轉(zhuǎn)角及無規(guī)則卷曲多出現(xiàn)在球蛋白表面，因?yàn)槭峭怀鼋Y(jié)構(gòu)，利于與抗體嵌合，成為抗原表位的可能性較大?；谏鲜隼碛桑ǔ⒌鞍踪|(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測作為確定抗原表位、蛋白質(zhì)相互作用位點(diǎn)的輔助手段。研究表明，蛋白分子通過其表面的親水環(huán)區(qū)與其他生物大分子相互作用。如免疫球蛋白與補(bǔ)體的結(jié)合位點(diǎn)在其Fc段中親水性最強(qiáng)的區(qū)域；煙草花葉病毒衣殼蛋白通過其親水性最強(qiáng)的區(qū)段與其DNA分子結(jié)合；蛋白酶催化底物的作用位點(diǎn)也常是親水性強(qiáng)的位點(diǎn)。隨著篩選靶標(biāo)范圍的擴(kuò)大，核酸分子甚至小分子化合物、金屬離子等結(jié)合肽均可獲得，這為研究復(fù)雜的生命活動(dòng)過程中各種類型分子間相互作用提供了有力工具，擴(kuò)展了研究的廣度和深度。通過篩選蛋白分子的抗原表位，不僅有助于確定抗原與抗體相互作用的位點(diǎn)（即抗原表位），而且有助于確定配體與受體、酶與底物、蛋白分子與其他分子相互作用的位點(diǎn)。

編輯推薦

《生物文庫技術(shù):噬菌體展示與SELEX技術(shù)》為國家“十一五”重點(diǎn)圖書出版項(xiàng)目。

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