基礎(chǔ)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)

內(nèi)容概要

　　《基礎(chǔ)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》本著少而精、應(yīng)用靈活的原則，共選編了19個(gè)具有代表性、較為成熟的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，包括定量分析技術(shù)、層析技術(shù)、電泳技術(shù)、生物大分子制備技術(shù)和免疫學(xué)技術(shù)，涵蓋了生物大分子定量測(cè)定、分離純化及鑒定的常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)。其中既有基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，也有提高性、探究性的實(shí)驗(yàn)。絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容相對(duì)獨(dú)立，在6—16學(xué)時(shí)內(nèi)可以完成。在實(shí)際教學(xué)中，可以將多個(gè)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)有機(jī)地聯(lián)系在一起組合成綜合性實(shí)驗(yàn)，構(gòu)成每學(xué)期80—120學(xué)時(shí)的教學(xué)內(nèi)容，以期通過(guò)綜合、多樣性的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，對(duì)學(xué)生進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn)的系統(tǒng)訓(xùn)練，加強(qiáng)學(xué)生的基本操作技能，提高學(xué)生動(dòng)腦和動(dòng)手能力，培養(yǎng)學(xué)生理論與實(shí)踐相結(jié)合的分析問(wèn)題、解決問(wèn)題的能力。　　《基礎(chǔ)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》可作為綜合性大學(xué)、師范、醫(yī)藥和農(nóng)林院校等生物科學(xué)及相關(guān)專(zhuān)業(yè)的本科生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)教材，也可供相關(guān)專(zhuān)業(yè)的研究生參考。

書(shū)籍目錄

第一章 定量分析技術(shù)實(shí)驗(yàn)一單糖定量測(cè)定——3，5一二硝基水楊酸法實(shí)驗(yàn)二蛋白質(zhì)定量測(cè)定(I)——Folin酚法實(shí)驗(yàn)三蛋白質(zhì)定量測(cè)定(Ⅱ)——考馬斯亮藍(lán)法實(shí)驗(yàn)四蛋白質(zhì)定量測(cè)定(Ⅲ)——紫外吸收法實(shí)驗(yàn)五核酸定量測(cè)定(I)——定磷法實(shí)驗(yàn)六核酸定量測(cè)定(Ⅱ)——紫外吸收法參考文獻(xiàn)第二章 層析技術(shù)實(shí)驗(yàn)七凝膠過(guò)濾層析——測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量實(shí)驗(yàn)八離子交換層析——分離核苷酸實(shí)驗(yàn)九親和層析——分離谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶附：谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶的動(dòng)力學(xué)研究實(shí)驗(yàn)十金屬螯合層析——分離超氧化物歧化酶實(shí)驗(yàn)十一薄層層析——蛋白質(zhì)氨基酸組成分析參考文獻(xiàn)第三章 電泳技術(shù)實(shí)驗(yàn)十二聚丙烯酰胺凝膠凈電荷電泳——乳酸脫氫酶同工酶的鑒定實(shí)驗(yàn)十三SDS一聚丙烯酰胺凝膠電泳——測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量實(shí)驗(yàn)十四聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳——測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)參考文獻(xiàn)第四章 生物大分子制備技術(shù)實(shí)驗(yàn)十五細(xì)胞色素c的制備及含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)十六豬脾DNA的提取附：二苯胺顯色法測(cè)定脫氧核糖核酸含量參考文獻(xiàn)第五章 免疫學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)十七抗血清的制備和抗體的純化實(shí)驗(yàn)十八抗體效價(jià)測(cè)定及組分鑒定——雙向擴(kuò)散，對(duì)流免疫電泳，微量免疫電泳，雙向免疫電泳實(shí)驗(yàn)十九酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定——間接法測(cè)定抗體效價(jià)參考文獻(xiàn)附錄一、常用緩沖溶液的配制方法二、硫酸銨飽和度的常用計(jì)算表三、常用市售酸、堿的濃度四、常用蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參照表五、某些蛋白質(zhì)的物理性質(zhì)六、一些常見(jiàn)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)參考值七、常用離子交換纖維素八、離子交換層析介質(zhì)的技術(shù)數(shù)據(jù)九、凝膠過(guò)濾層析介質(zhì)的技術(shù)數(shù)據(jù)十、部分親和層析介質(zhì)的技術(shù)數(shù)據(jù)十一、各種層析介質(zhì)所允許的最大操作壓十二、離心機(jī)轉(zhuǎn)數(shù)與相對(duì)離心力(RcF)的換算

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁(yè)：插圖：從抗原的化學(xué)結(jié)構(gòu)上看，決定機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的是抗原分子上一些特定的化學(xué)基團(tuán)，稱(chēng)為抗原決定簇，它們是誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體并與抗體結(jié)合的部位?？乖贵w反應(yīng)的高度特異性能精確區(qū)分抗原間的微細(xì)差別，這種特異性是由抗原表面決定簇的化學(xué)組成、空間排列和立體構(gòu)型決定的，抗原決定簇與抗體分子超變區(qū)的空間結(jié)構(gòu)互補(bǔ)決定了高特異性。相同抗原分子可具有多種不同的抗原決定簇，不同抗原分子也可以具有相似的抗原決定簇，在與抗體反應(yīng)時(shí)可能出現(xiàn)交叉反應(yīng)?？乖c抗體以非共價(jià)鍵結(jié)合，這種結(jié)合是相當(dāng)穩(wěn)定的，也是可逆的，在酸、堿或者高鹽的條件下兩者可以解離，解離后抗原和抗體仍保持原有的性質(zhì)?？乖瓫Q定簇和抗體分子可變區(qū)的空間構(gòu)型互補(bǔ)程度不同，抗原與抗體分子之間結(jié)合力強(qiáng)弱也不同，抗原和抗體互補(bǔ)程度越高，則親和力越強(qiáng)，越不容易解離?？乖贵w反應(yīng)過(guò)程首先是特異結(jié)合階段，這一結(jié)合過(guò)程僅需幾秒鐘到幾分鐘，因此肉眼觀察不到；然后是可見(jiàn)反應(yīng)階段，抗原與抗體間進(jìn)一步交聯(lián)而形成網(wǎng)格狀聚集物，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀，這一階段速度要慢得多，需數(shù)分鐘、數(shù)小時(shí)乃至數(shù)日，并且受溫度、離子強(qiáng)度和酸堿度等外界因素的影響。通常抗原有多個(gè)抗原決定簇，可刺激多種具有相應(yīng)抗原受體的B細(xì)胞產(chǎn)生多種針對(duì)不同抗原決定簇的抗體?？乖c相應(yīng)的抗體具有表面結(jié)合的特性，由于抗原是多價(jià)的，所以可結(jié)合多個(gè)抗體分子。具有抗體活性的免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu)是由4條肽鏈組成，包括2條相同的輕鏈和2條相同的重鏈，由二硫鍵連接形成一個(gè)四肽鏈分子（圖5-2）?？贵w一般有2個(gè)抗原結(jié)合點(diǎn)，只能結(jié)合2個(gè)抗原分子的抗原決定簇，故稱(chēng)抗體是二價(jià)的。可溶性抗原與抗體比例合適時(shí)，可結(jié)合形成較大的不溶性免疫復(fù)合物，在反應(yīng)體系中出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的不透明的沉淀物，這種抗原抗體反應(yīng)稱(chēng)為沉淀反應(yīng)，具有特異性和可逆性?？乖c抗體的比例決定結(jié)合物的大小和能否出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀現(xiàn)象（圖5-3）。在一定量的抗體中加入不同量的抗原時(shí)，產(chǎn)生抗原一抗體復(fù)合物的數(shù)量可分成3個(gè)區(qū)帶，其中等價(jià)帶中抗原、抗體比例最合適，形成大且多的抗原一抗體復(fù)合物，出現(xiàn)明顯的沉淀反應(yīng)，此時(shí)在反應(yīng)體系中測(cè)不出或有極低的游離抗原或抗體；抗體過(guò)剩帶和抗原過(guò)剩帶中，抗原和抗體比例均不合適，所形成的結(jié)合物小且少，反應(yīng)體系中存在著大量游離的抗原或抗體（圖5-4）。因此在抗原抗體的檢測(cè)中，應(yīng)調(diào)整抗原和抗體的比例，得到肉眼可見(jiàn)的沉淀反應(yīng)。

編輯推薦

《基礎(chǔ)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》是普通高等教育“十一五”國(guó)家級(jí)規(guī)劃教材之一。

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