實用醫(yī)學(xué)細胞培養(yǎng)技術(shù)

內(nèi)容概要

　　本書系統(tǒng)、全面地介紹了細胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)理論，較詳細地敘述了動物細胞培養(yǎng)必需的用品器材、具體的操作步驟及注意事項等。主要內(nèi)容包括：培養(yǎng)細胞的生存條件和環(huán)境、培養(yǎng)細胞的生物學(xué)特性、細胞培養(yǎng)實驗室的布局、無菌技術(shù)、細胞分離技術(shù)、細胞培養(yǎng)觀察和檢測技術(shù)、細胞培養(yǎng)基本技術(shù)、細胞培養(yǎng)特殊技術(shù)、常用醫(yī)用細胞培養(yǎng)技術(shù)、常用腫瘤細胞培養(yǎng)技術(shù)、細胞規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)、細胞培養(yǎng)過程中的污染及處理、細胞培養(yǎng)的常見問題及對策等，共13章?！　”緯接兄型饧毎麕旒捌渌峁┑募毎夸?、細胞培養(yǎng)常用培養(yǎng)用液配方等，使全書內(nèi)容更為系統(tǒng)，便于讀者查閱。　　本書既適宜作為生物學(xué)、醫(yī)學(xué)及其他相關(guān)專業(yè)的研究生教材，也可作為相關(guān)領(lǐng)域科研人員的參考書。

書籍目錄

第一章 培養(yǎng)細胞的生存條件和環(huán)境　第一節(jié) 體外細胞生存的營養(yǎng)條件　　一、水　　二、無機鹽類　　三、糖類　　四、維生素　　五、氨基酸　　六、溫度　　七、氧和酸堿度　　八、細胞之間的相互聯(lián)系　第二節(jié) 培養(yǎng)用液　　一、水與緩沖液　　二、生理鹽水與平衡鹽溶液　第三節(jié) 培養(yǎng)基　　一、發(fā)展史　　二、物理化學(xué)特征　　三、完全培養(yǎng)基　　四、血清培養(yǎng)基和血清的選擇　　五、其他添加物　第四節(jié) 無血清培養(yǎng)基　　一、使用含血清培養(yǎng)基的缺點　　二、無血清培養(yǎng)基的優(yōu)缺點　　三、無血清培養(yǎng)基的血清替代　　四、無血清培養(yǎng)基的選擇與制備　第五節(jié) 體外細胞的生長環(huán)境　　一、體外培養(yǎng)實驗室　　二、體外培養(yǎng)的設(shè)備與器具第二章 培養(yǎng)細胞的生物學(xué)特性　第一節(jié) 細胞黏附　　一、吸附和接觸　　二、貼壁　　三、鋪展　第二節(jié) 細胞增殖　　一、細胞周期　　二、細胞增殖和培養(yǎng)細胞的生命分期　第三節(jié) 細胞分化　　一、細胞分化潛能的變化　　二、體外培養(yǎng)細胞分化狀態(tài)的維持　第四節(jié) 細胞去分化　第五節(jié) 能量代謝　第六節(jié) 細胞系的演化　第七節(jié) 連續(xù)細胞系的形成　第八節(jié) 體外培養(yǎng)細胞的生長類型　　一、黏附型細胞　　二、懸浮型細胞第三章 細胞培養(yǎng)實驗室的布局　第一節(jié) 實驗室規(guī)劃及使用布局　　一、總體原則　　二、細胞培養(yǎng)實驗室的組成與布局　第二節(jié) 無菌操作設(shè)施和工作間　　一、常用的無菌操作設(shè)施　　二、細胞培養(yǎng)工作間　第三節(jié) 實驗室設(shè)備　第四節(jié) 器械及消耗性物品　　一、手術(shù)器械　　二、消耗性物品第四章 無菌技術(shù)　第一節(jié) 概述　　一、目標　　二、滅菌操作　　三、層流標準　　四、方法　　五、儀器和設(shè)備　第二節(jié) 準備與滅菌　　一、設(shè)備、試劑和培養(yǎng)基　　二、培養(yǎng)基的質(zhì)控、檢測和儲存　第三節(jié) 清洗和消毒　　一、培養(yǎng)用具的清洗　　二、培養(yǎng)用品的消毒和滅菌第五章 細胞分離技術(shù)　第一節(jié) 利用細胞體積和密度差異進行細胞分離純化　　一、一步密度梯度離心法　　二、等密度梯度離心法　第二節(jié) 根據(jù)細胞表面電荷的細胞分離純化　　一、自由流動電泳分離技術(shù)　　二、密度梯度電泳分離技術(shù)　第三節(jié) 利用細胞表面標志進行細胞分離純化　　一、免疫溶解法　　二、盤化法　　三、凝集素凝集法　　四、玫瑰花環(huán)分離法　　五、流式細胞分選術(shù)　　六、免疫磁珠分離技術(shù)　第四節(jié) 利用其他細胞學(xué)特性分離純化細胞的方法　　一、反復(fù)植塊法　　二、有絲分裂抑制劑處理第六章 細胞培養(yǎng)觀察和檢測技術(shù)　第一節(jié) 顯微鏡技術(shù)　　一、普通顯微鏡的構(gòu)造及使用方法　　二、相差顯微鏡的構(gòu)造及使用方法　　三、熒光顯微鏡的構(gòu)造及使用方法　　四、激光共聚焦顯微鏡的原理、構(gòu)造及應(yīng)用　　五、透射電子顯微鏡與超薄切片技術(shù)　　六、掃描電子顯微鏡與樣品制備　　七、顯微攝影技術(shù)　　八、活細胞的動態(tài)觀察與縮時電影　第二節(jié) 細胞及細胞成分染色及顯示　　一、蘇木素伊紅(HematoxylinandEosin，HE)染色法　　二、吉姆薩(Ciemsa)染色法　　三、載玻片處理方法　　四、活細胞體外活體染色觀察與活體染料　　五、細胞中糖類和脂類的顯示　　六、細胞中過氧化物酶的顯示　　七、細胞中一氧化氮合酶的顯示　　八、細胞中琥珀酸脫氫酶的顯示　　九、細胞中酸性磷酸酶的顯示　　十、細胞中堿性蛋白的顯示　　十一、細胞中線粒體的活體染色　　十二、微絲的染色及形態(tài)觀察　　十三、胞質(zhì)微管的間接免疫熒光顯示技術(shù)　　十四、細胞中DNA與RNA的吖啶橙熒光染色法　　十五、細胞中DNA的富爾根(Feulgen)染色法第七章 細胞培養(yǎng)基本技術(shù)　第一節(jié) 細胞傳代和換液　　一、原代培養(yǎng)　　二、繼代培養(yǎng)　　三、細胞換液　第二節(jié) 細胞培養(yǎng)的基本方法和技術(shù)　　一、懸滴培養(yǎng)法　　二、蓋玻片培養(yǎng)法　　三、培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法　　四、培養(yǎng)板培養(yǎng)法　　五、旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)法　　六、灌注小室培養(yǎng)法　　七、二倍體細胞培養(yǎng)法　　八、克隆培養(yǎng)法　　九、中空纖維細胞培養(yǎng)技術(shù)　　十、微載體細胞培養(yǎng)法　　十一、微囊培養(yǎng)技術(shù)　第三節(jié) 細胞活性及計數(shù)　　一、活細胞的染料排除檢測法　　二、細胞增殖活性測定的H-TdR摻入法　　三、細胞活力測定的MTT比色法　　四、細胞生長曲線　……第八章 細胞培養(yǎng)的特殊技術(shù)第九章 常用醫(yī)用細胞培養(yǎng)第十章 常用腫瘤細胞培養(yǎng)第十一章 細胞規(guī)模培養(yǎng)第十二章 細胞培養(yǎng)過程中的污染及處理第十三章 細胞培養(yǎng)的常見問題及對策附錄

章節(jié)摘錄

　?。ǘ┘に亍⊙逯泻懈鞣N激素，如胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（氫化可的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。血清的添加可以補充基礎(chǔ)培養(yǎng)液中沒有或量不足的此類營養(yǎng)成分。某些激素具有重要生理作用，例如胰島素可促進葡萄糖和氨基酸的利用；生長激素與促生長因子（IGFs）的結(jié)合可能具有有絲分裂原的效果；氫化可的松可促進細胞的附著和增殖，而在特定的條件下（如高細胞密度）可以抑制細胞生長并誘導(dǎo)細胞分化?！　。ㄈ┥L因子　通過實驗觀察到，使用自然凝集獲得的血清比使用物理方法（例如離心）處理血液得到的血清有更好的刺激細胞增殖效果，這是因為血液凝集的過程中釋放了血小板生長因子（PDGF）到血清中。PDGF是具有有絲分裂原活性的多肽家族的一種，可以有效刺激成纖維細胞和神經(jīng)膠質(zhì)細胞的生長。血清中還含有其他眾多生長因子成分。某些血小板生成因子（例如FGF-B）有抑制成纖維細胞生長或者促進上皮類細胞分化的作用。胰島素類生長因子IGF-和IGⅡ可以結(jié)合到細胞表面的胰島素受體上，具有類胰島素的功能。另外還有微量的成纖維細胞生長因子（FGF）、上皮細胞生長因子（EGF）、內(nèi)皮細胞生長因子、增殖刺激活力（multipli-cation.stimulating activity，MSA）因子，它們都具有各自的功能?！　。ㄋ模┵N壁和擴展因子　體外培養(yǎng)的細胞中，黏附型細胞必須貼附于培養(yǎng)器皿才能生長。血清中含有促進細胞貼附和鋪展的生長基質(zhì)成分，如纖連蛋白（fibronectin，F(xiàn)N）、層粘連蛋白（1aminin，LN）、胎球蛋白等，它們存在于細胞分泌的細胞外基質(zhì)中，但在體外生長時，隨著細胞傳代次數(shù)的增加，細胞的分泌能力逐漸下降甚至丟失，促細胞貼壁能力下降。血清的添加可彌補此種不足，增強細胞的貼附能力?！　。ㄎ澹┑鞍踪|(zhì)　血清的蛋白質(zhì)（主要是結(jié)合蛋白）具有攜帶重要的低分子量物質(zhì)的作用，例如白蛋白攜帶維生素、脂肪酸、膽固醇以及激素；轉(zhuǎn)鐵蛋白可結(jié)合鐵離子，使其毒性減小而具有生物可利用性。

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