生物化學實驗教程

內容概要

　　《普通高等教育“十二五”重點規(guī)劃教材·生命科學應用型系列教材：生物化學實驗教程》分四個部分，第一部分是實驗的基礎理論部分，包括生物化學須知、生物大分子提取與分離、分光光度法及比色分析法、電泳法技術、層析技術、離心技術、透析技術。第二部分以實驗為主體，闡述了常用的基礎實驗技術、綜合性實驗、設計性實驗?！镀胀ǜ叩冉逃笆濉敝攸c規(guī)劃教材·生命科學應用型系列教材：生物化學實驗教程》的目的是培養(yǎng)學生嚴謹的科學態(tài)度，獨立思維以及獨立完成實驗過程的能力。
　　《普通高等教育“十二五”重點規(guī)劃教材·生命科學應用型系列教材：生物化學實驗教程》適用于高等院校的生物科學、生物技術、生物工程、動物科學、農業(yè)科學、園藝、食品科學等專業(yè)學生使用，也可供相關技術人員參考。

書籍目錄

第一部分 生物化學技術概論
1 生物化學須知
1.1 生物化學實驗技術發(fā)展簡史
1.2 實驗室規(guī)則
1.3 實驗室安全及防護知識
1.4 實驗報告
1.5 實驗室基本操作
1.6 緩沖溶液與pH測定
1.7 生化實驗室的基本設施與裝備
2 生物大分子提取與分離
2.1 實驗材料的處理
2.2 生物材料處理的常用方法
2.3 目的物分離與提取
2.4 目的物的沉淀分離
2.5 過濾與膜分離技術
2.6 溶劑萃取法
2.7 反膠束萃取
2.8 超臨界（流體）萃取
3 分光光度法及比色分析法
3.1 原理
3.2 分光光度計的構造
3.3 7220型分光光度計
4 電泳法
4.1 電泳的基本原理
4.2 影響電泳的主要因素
4.3 區(qū)帶電泳的分類
4.4 幾種常見的電泳方法
5 層析技術
5.1 層析技術概述
5.2 凝膠層析
5.3 離子交換層析
5.4 親和層析
5.5 具體的一些層析方法
5.6 高效液相色譜
6 離心技術
6.1 基本原理．
6.2 離心機的主要構造和類型
6.3 離心技術的應用
6.4 電動離心機的使用方法及注意事項
7 透析
7.1 膜
7.2 溶劑
7.3 物理條件
7.4 董南（Donnan）膜平衡
第二部分 生物化學實驗
實驗1 生物化學基礎實驗
實驗1.1 糖類的性質實驗（糖的顏色反應）
實驗1.2 糖類的性質實驗（糖的還原作用）
實驗1.3 總糖的測定——硫酸蒽酮法
實驗1.4 血糖的定量測定
實驗1.5 3，5-二硝基水楊酸比色法測定糖的含量
實驗1.6 糖的薄層層析
實驗1.7 粗脂肪的定量測定——索氏抽提法
實驗1.8 脂肪酸的β-氧化
實驗1.9 碘值的測定
實驗1.10 酸價的測定
實驗1.11 膽固醇的測定
實驗1.12 卵磷脂的提取及鑒定
實驗1.13 氨基酸的分離鑒定——紙層析法
實驗1.14 氨基酸分離——雙向層析法
實驗1.15 蛋白質的沉淀反應、顏色反應及等電點的測定
實驗1.16 雙縮脲法測定蛋白質含量
實驗1.17 Folin-酚法測定蛋白質含量
實驗1.18 微量凱氏定氮法
實驗1.19 SDS-PAGE測定蛋白質分子量
實驗1.20 葡聚糖凝膠層析脫鹽
實驗1.21 醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白
實驗1.22 血清蛋白質聚丙烯酰胺凝膠電泳
實驗1.23 考馬斯亮藍法測蛋白質濃度
實驗1.24 紫外吸收法測定蛋白質含量
實驗1.25 脲酶Km值簡易測定法
……
附錄
主要參考文獻

章節(jié)摘錄

版權頁：   插圖：   2.4.2.4 復合沉淀法 在溶液中加入某些物質，使它與蛋白質等形成復合物而沉淀下來，從而達到分離的方法，稱為復合沉淀法。分離出復合沉淀后，有的可以直接應用，如菠蘿蛋白酶用單寧沉淀法得到的單寧一菠蘿蛋白酶復合物，可以直接作為藥品，用于治療咽喉炎等。也可以再用適當的方法，使酶從復合物中析出，而進一步純化。 常用的復合沉淀劑有單寧、聚乙二醇、聚丙烯酸等高分子聚合物。 例如，以單寧為沉淀劑進行酶的復合沉淀，在操作時，先將酶溶液調節(jié)到一定的pH（不同的酶，應調節(jié)在不同的pH，一般控制在pH 4～7的范圍內），然后加入一定量的單寧（一般單寧的加入量，為酶溶液的0.1％～1％），生成酶一單寧復合物沉淀。分離出的酶一單寧復合物可以直接應用。如果要進一步純化，可將沉淀分離出來后，用乙醇或丙酮處理以除去單寧；也可以用pH8～11的碘酸鈉或硼酸鈉處理，使酶溶解出來，而單寧仍然為沉淀；還可以采用吐溫60（聚氧乙烯山梨糖醇硬脂酸酯）、吐溫80（聚氧乙烯山梨糖醇油酸酯）、分子量大于6000的PEG（聚乙二醇）或PVP（聚乙烯氮戊環(huán)酮）等大分子進行復分解反應。這些大分子聚合物可與單寧形成難溶于水的樹脂狀沉淀，而使酶游離出來。單寧復合沉淀法適用于各種來源的蛋白酶、淀粉酶、糖化酶、果膠酶、纖維素酶等的沉淀分離。 再如，聚丙烯酸也可以作為復合沉淀劑，用于酶的沉淀分離。在使用時，將酶液調節(jié)至pH 3～5，加入適量的聚丙烯酸（一般為酶蛋白量的30％～40％），生成酶一聚丙烯酸沉淀。進一步純化是將沉淀分離出來后，用稀堿液調節(jié)pH至6以上，則復合物中的酶與聚丙烯酸分開，再加入一定量的Ca2+、M92+、Al3+等金屬離子，與聚丙烯酸反應生成聚丙烯酸鹽沉淀，而使酶游離出來。分離得到的聚丙烯酸鹽沉淀，可以用1mol／L硫酸處理，回收聚丙烯酸循環(huán)使用。 2.4.2.5金屬鹽沉淀法 利用溶液中某種溶質與某些金屬離子反應，生成金屬鹽沉淀，而與其他組分分離的方法稱為金屬鹽沉淀法。常用的金屬鹽沉淀法有鈣鹽沉淀法、鉛鹽沉淀法等。 例如，在核酸的水提取液中，加入一定體積比（一般為10％左右）的10％氯化鈣溶液，使DNA和RNA均形成鈣鹽，再加入1／5體積的乙醇，DNA—Ca即沉淀析出。 再如，在含有倍半萜的乙醇抽提液中，加入4％的乙酸鉛溶液，減壓除去乙醇，即可得到倍半萜的鉛鹽沉淀。脫鉛的方法通常是通人硫化氫氣體，生成溶解度更小的硫化鉛，而得到倍半萜。

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